發(fā)布時間：2023-09-14 01:43

　　細胞的正常生命活動涉及到各種蛋白質(zhì)翻譯后修飾方式的調(diào)控,這些修飾能調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)生物學(xué)功能及細胞信號網(wǎng)絡(luò)。雖然這并不改變蛋白質(zhì)合成和降解的速度,但可能影響蛋白質(zhì)的功能,因此增加了蛋白質(zhì)功能研究的復(fù)雜性。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的方式和形式有很多種。SUMO (small ubiquitin-related modifier,小泛素相關(guān)修飾物)是一類結(jié)構(gòu)與泛素類似的小分子修飾物(Ubls)。目前,在哺乳動物中已存在SUMO-1, SUMO-2, SUMO-3和SUMO-4四種SUMO分子。SUMO-1則是一種分子量約12 KDa,在真核生物中廣泛存在SUMO分子。通過E1、E2以及E3酶的催化作用,與底物蛋白相結(jié)合而起作用。這一特異性的結(jié)合過程叫做SUMO化(SUMOylation). SUMO化作為一種動態(tài)可逆的蛋白翻譯后修飾方式之一,能被SUMO特異性蛋白酶(SENP)所逆轉(zhuǎn),這一動態(tài)平衡參與調(diào)控真核細胞多種生物學(xué)過程,如細胞周期,細胞凋亡,細胞增殖和分化、兩種或多種蛋白質(zhì)之間的相互作用,信號傳導(dǎo),調(diào)節(jié)靶蛋白分子的細胞定位／轉(zhuǎn)運、穩(wěn)定性、轉(zhuǎn)錄活性和生物學(xué)活性等等。在哺乳動物中,增殖和分化的卵巢顆...

【文章頁數(shù)】：141 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表(Abbreviation words)
第一章 文獻綜述
    1 蛋白質(zhì)的翻譯后修飾研究進展
        1.1 糖基化
        1.2 甲基化
        1.3 乙�；�
        1.4 磷酸化
        1.5 泛素化
    2 SUMO基因的研究進展
        2.1 SUMO家族
        2.2 SUMO化修飾過程及其酶體系
            2.2.1 SUMO化修飾過程
            2.2.2 SUMO化酶體系
        2.3 SUMO化修飾的底物蛋白研究
        2.4 SUMO化修飾的生物學(xué)功能
            2.4.1 調(diào)節(jié)蛋白間的互作
            2.4.2 調(diào)節(jié)蛋白定位
            2.4.3 調(diào)節(jié)蛋白的核漿轉(zhuǎn)運
            2.4.4 調(diào)節(jié)信號通路,影響轉(zhuǎn)錄活性
            2.4.5 維持染色體的正常結(jié)構(gòu)和功能
            2.4.6 SUMO化與細胞凋亡
    3 PTX3
        3.1 PTX3的組成和結(jié)構(gòu)
        3.2 PTX3的作用
    4 顆粒細胞對卵泡發(fā)育的影響
        4.1 卵泡發(fā)育過程
        4.2 顆粒細胞的發(fā)育過程
        4.3 顆粒細胞對卵泡發(fā)育的影響
        4.4 顆粒細胞的凋亡
    5 研究的目的和意義
第二章 SUMO-1和UBC9真核表達載體的構(gòu)建及鑒定
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 材料
            2.1.1 主要生化材料及試劑
            2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.2 方法
            2.2.1 小鼠顆粒細胞總RNA提取
            2.2.2 反轉(zhuǎn)錄cDNA
            2.2.3 SUMO-1及UBC9引物的設(shè)計及片段的擴增
            2.2.4 PCR產(chǎn)物回收和純化
            2.2.5 連接反應(yīng)、轉(zhuǎn)化、挑選陽性克隆、測序驗證以及質(zhì)粒抽提
            2.2.6 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    3 結(jié)果
        3.1 小鼠顆粒細胞總RNA結(jié)果檢測
        3.2 SUMO-1及UBC9基因片段擴增
        3.3 SUMO-1及UBC9各種重組載體的構(gòu)建和鑒定
        3.4 質(zhì)粒測序鑒定
    4 討論
    5. 小結(jié)
第三章 SUMO-1及UBC9對小鼠卵巢顆粒細胞的作用研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料
            2.1.1 實驗動物、材料及試劑
            2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.2 方法
            2.2.1 卵巢顆粒細胞培養(yǎng)
            2.2.2 顆粒細胞轉(zhuǎn)染
            2.2.3 細胞周期檢測
            2.2.4 細胞凋亡檢測
            2.2.5 細胞增殖檢測
            2.2.6 Western Blotting(WB)
            2.2.7 免疫組織化學(xué)(IHC)
            2.2.8 免疫細胞化學(xué)(ICC)
    3 結(jié)果
        3.1 pEGFP-C1-SUMO-1及pEGFP-C1-UBC9重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染小鼠顆粒細胞
        3.2 SUMO-1及UBC9在小鼠卵巢及顆粒細胞中的表達規(guī)律
        3.3 SUMO-1及UBC9在小鼠卵巢中的定位
        3.4 SUMO-1及UBC9對小鼠顆粒細胞亞細胞定位的影響
        3.5 SUMO-1及UBC9對顆粒細胞周期的影響
        3.6 SUMO-1及UBC9對顆粒細胞增殖的影響
        3.7 SUMO-1及UBC9對顆粒細胞凋亡的影響
    4 討論
        4.1 SUMO-1和UBC9在卵巢及顆粒細胞中表達的作用
        4.2 SUMO-1和UBC9對細胞定位的影響
        4.3 SUMO-1和UBC9對顆粒細胞周期、增殖和凋亡的調(diào)控
    5 小結(jié)
第四章 PTX3的SUMO-1修飾在小鼠卵巢顆粒細胞中的研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 材料
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.2 方法
            2.2.1 PTX3片段合成
            2.2.2 PTX3片段回收和純化
            2.2.3 PTX3重組質(zhì)粒的構(gòu)建
            2.2.4 卵巢顆粒細胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
            2.2.5 Western Blotting(WB)
            2.2.6 免疫細胞化學(xué)(ICC)
            2.2.7 免疫共沉淀(IP)
    3 結(jié)果
        3.1 PTX3真核表達載體的構(gòu)建
            3.1.1 PTX3的SUMO化位點預(yù)測
            3.1.2 PTX3及PTX3^k203R目的片段的擴增
            3.1.3 pCMV-N-HA-PTX3/pCMV-N-HA-PTX3^K203R基因真核表達載體的構(gòu)建和鑒定
            3.1.4 質(zhì)粒測序鑒定
        3.2 PTX3的SUMO-1修飾對顆粒細胞的影響
            3.2.1 PTX3的SUMO-1修飾位點檢測及其蛋白表達情況研究
            3.2.2 PTX3的SUMO-1修飾對其在顆粒細胞定位的影響
    4 討論
    5 小結(jié)
結(jié)論
研究創(chuàng)新點與不足
參考文獻
附錄Ⅰ 發(fā)表的主要文章
附錄Ⅱ 在Genbank登錄的基因片段
附錄Ⅲ 出版的書籍
附錄Ⅳ 參加的學(xué)術(shù)活動
致謝



本文編號：3846308