偽狂犬病毒(Pseudorabies Virus,PRV)能引起多種動(dòng)物的發(fā)熱、奇癢及腦脊髓炎。豬是PRV的貯存宿主和傳染源,PRV感染豬引起偽狂犬病,導(dǎo)致新生仔豬出現(xiàn)致死性腦炎,肥育豬呼吸障礙,母豬繁殖障礙等癥狀。PRV屬于皰疹病毒科,在全世界廣泛分布。2012年,在中國(guó)北部和東部地區(qū),豬偽狂犬病史無(wú)前例的大規(guī)模爆發(fā),對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前PRV的致病機(jī)制還不是很清楚。為進(jìn)一步研究PRV感染引起的宿主細(xì)胞的基因表達(dá)變化,尋找治療豬偽狂犬病的可能靶標(biāo),本研究利用同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量(Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantification,iTRAQ)技術(shù)分析了PRV感染豬腎上皮細(xì)胞(Porcine Epithelial Cells,PK15)后的全基因組蛋白表達(dá)變化,并對(duì)差異表達(dá)蛋白基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)PRV感染后能夠引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)為進(jìn)一步研究PRV與宿主細(xì)胞互作提供了分子基礎(chǔ)。1.PRV感染PK15細(xì)胞的蛋白質(zhì)組學(xué)研究一步生長(zhǎng)曲線顯示,在PRV ZJ(浙江)株感染PK15細(xì)胞后24h時(shí),病毒滴度最...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 豬偽狂犬病毒
        1.1.1 PRV的基因組結(jié)構(gòu)
        1.1.2 PRV感染機(jī)制
    1.2 蛋白質(zhì)組學(xué)的研究技術(shù)
        1.2.1 蛋白質(zhì)組學(xué)在病毒學(xué)研究中的應(yīng)用
        1.2.2 同位素標(biāo)記相對(duì)與絕對(duì)定量(iTRAQ)技術(shù)
        1.2.3 iTRAQ技術(shù)的實(shí)驗(yàn)原理
        1.2.4 iTRAQ的優(yōu)勢(shì)
    1.3 PERK信號(hào)通路的調(diào)控機(jī)制
        1.3.1 熱休克蛋白HSP70家族
        1.3.2 蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶
        1.3.3 真核細(xì)胞起始因子
        1.3.4 激活轉(zhuǎn)錄因子
    1.4 細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶
第二章 PRV感染PK15細(xì)胞的蛋白質(zhì)組學(xué)研究
    2.1 研究目的與意義
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 細(xì)胞、毒株
        2.2.2 主要試劑
        2.2.3 Westernblot抗體試劑
        2.2.4 Westernblot主要緩沖液及試劑配置
        2.2.5 主要實(shí)驗(yàn)儀器及材料
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 細(xì)胞的復(fù)蘇
        2.3.2 豬偽狂犬病毒擴(kuò)大培養(yǎng)
        2.3.3 病毒滴度的測(cè)定
        2.3.4 用于蛋白質(zhì)組學(xué)分析的細(xì)胞樣品制備
        2.3.5 蛋白質(zhì)的Bradford定量
        2.3.6 細(xì)胞蛋白分離與消化并用iTRAQ標(biāo)記
        2.3.7 LC-MSMS分析
        2.3.8 生物信息學(xué)分析
        2.3.9 免疫熒光實(shí)驗(yàn)
        2.3.10 Westernblot實(shí)驗(yàn)
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 Bradford定量和SDS質(zhì)檢結(jié)果
        2.4.2 PRV感染PK15細(xì)胞動(dòng)力學(xué)分析
        2.4.3 蛋白質(zhì)的鑒定結(jié)果
        2.4.4 差異蛋白的驗(yàn)證
    2.5 討論
        2.5.1 參與代謝過(guò)程的差異表達(dá)蛋白
        2.5.2 參與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白質(zhì)加工的差異表達(dá)蛋白
        2.5.3 參與翻譯的差異表達(dá)蛋白
        2.5.4 參與mRNA前體剪接的差異表達(dá)蛋白
        2.5.5 參與ECM-受體相互作用和細(xì)胞骨架的差異表達(dá)蛋白
        2.5.6 其它差異表達(dá)的蛋白
第三章 PRV感染激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)通路的分子機(jī)制
    3.1 研究的目的與意義
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 主要試劑(同2.2.2)
        3.2.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備(同2.2.5)
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 細(xì)胞的復(fù)蘇(同2.3.1)
        3.3.2 PRV感染PK15細(xì)胞
        3.3.3 細(xì)胞總蛋白的提取
        3.3.4 BCA蛋白濃度測(cè)定
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 蛋白質(zhì)的BCA測(cè)定結(jié)果
        3.4.2 Westernblot分析結(jié)果
        3.4.3 討論
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
下一步研究計(jì)劃
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)介
碩士期間發(fā)表論文
致謝



本文編號(hào)：3845483