為制備針對犬細(xì)小病毒(CPV)的單克隆抗體,以純化的CPV免疫BALB/c小鼠,3次免疫后,取其脾細(xì)胞與SP2/0細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合。利用超速離心純化的病毒作為包被抗原,采用間接ELISA方法篩選陽性雜交瘤細(xì)胞,獲得3株能穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,分別命名為1D9、3G9和4F6。單克隆抗體細(xì)胞培養(yǎng)上清效價為1∶64、1∶64、1∶128,腹水效價為1∶10⁴、1∶10⁴、1∶10⁵。3株雜交瘤細(xì)胞的染色體數(shù)分別為92、94、98。亞類鑒定結(jié)果顯示1D9和3G9重鏈為IgG1,4F6重鏈為IgG2b,輕鏈均為kappa鏈。病毒中和試驗表明,單克隆抗體4F6對CPV具有明顯的病毒中和活性。交叉試驗表明,3株單克隆抗體均可與CPV特異性結(jié)合,與其他犬類常見病毒無交叉反應(yīng)。本研究制備的單克隆抗體為CPV的檢測及其感染動物的治療提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要材料
    1.2 動物免疫
    1.3 間接ELISA篩選方法的建立
    1.4 細(xì)胞融合與培養(yǎng)
    1.5 陽性雜交瘤細(xì)胞的篩選及亞克隆
    1.6 MAb腹水制備及抗體純化
    1.7 MAb的中和活性鑒定
    1.8 MAb的鑒定
        1.8.1 效價的測定
        1.8.2 染色體數(shù)目的測定
        1.8.3 亞型鑒定
        1.8.4 間接免疫熒光鑒定(IFA)
        1.8.5 MAb抗病毒蛋白的鑒定
        1.8.6 交叉反應(yīng)性分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 間接ELISA檢測方法的建立
    2.2 亞類鑒定
    2.3 腹水抗體的純化
    2.4 效價測定
    2.5 染色體計數(shù)
    2.6 間接免疫熒光試驗
    2.7 MAb的病毒蛋白識別分析
    2.8 特異性試驗
    2.9 MAb的中和活性鑒定
3 討論



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