發(fā)布時(shí)間：2023-08-17 20:12

　　本研究旨在探討低氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)對(duì)牦牛腎小管上皮細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的影響。首先對(duì)牦牛腎小管上皮細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)鑒定,并選取第三代細(xì)胞對(duì)其分別進(jìn)行藥物處理(DMOG組)和不做藥物處理(對(duì)照組),檢測(cè)EMT相關(guān)基因在mRNA和蛋白水平的表達(dá)變化,并觀察細(xì)胞形態(tài)變化。結(jié)果表明:使用Ⅰ+Ⅱ型膠原酶可以更好地獲得腎小管上皮細(xì)胞;免疫熒光結(jié)果細(xì)胞CK18表達(dá)呈陽性,Vimentin和CD31呈陰性表達(dá);qRT-PCR和Western blot結(jié)果表明,DMOG組中的HIF-1α,TGF-β1,α-SMA在mRNA和蛋白水平均較對(duì)照組有極顯著增加(P<0.01),而E-cadherin的表達(dá)顯著降低(P<0.05);經(jīng)藥物干預(yù)后,細(xì)胞形態(tài)由鋪路石樣轉(zhuǎn)變?yōu)殚L(zhǎng)梭形,經(jīng)鑒定長(zhǎng)梭形細(xì)胞為間質(zhì)細(xì)胞。本研究成功建立了牦牛腎小管上皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)體系,并發(fā)現(xiàn)HIF-1α表達(dá)上調(diào)可以促進(jìn)牦牛腎小管上皮細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化。

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)樣品
    1.2 主要試劑和儀器
    1.3 牦牛腎小管上皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)
    1.4 牦牛腎小管上皮細(xì)胞的活性測(cè)定
    1.5 細(xì)胞免疫熒光鑒定
    1.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    1.7 Western blot
    1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
2 結(jié) 果
    2.1 消化酶的選擇
    2.2 生長(zhǎng)曲線測(cè)定
    2.3 牦牛腎小管上皮細(xì)胞的鑒定
    2.4 qRT-PCR檢測(cè)HIF-1α,TGF-β1,E-cadherin和α-SMA的mRNA表達(dá)
    2.5 Western blot檢測(cè)HIF-1α,TGF-β1,E-cadherin和α-SMA的蛋白表達(dá)
    2.6 藥物干預(yù)前后的細(xì)胞形態(tài)變化及轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞鑒定
3 討 論
4 結(jié) 論



本文編號(hào)：3842506