發(fā)布時(shí)間：2023-06-23 20:03

　　雞球蟲病是一種由艾美爾屬球蟲引起的胞內(nèi)寄生蟲疾病,每年都會(huì)給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。其中柔嫩艾美爾球蟲(Eimeria tenella,E.tenella)的致病性較強(qiáng)。在其第二代裂殖子階段,滋養(yǎng)體復(fù)分裂形成裂殖體,進(jìn)而產(chǎn)生大量裂殖子,對(duì)腸道造成不可逆損傷。因此,研究藥物對(duì)第二代裂殖子時(shí)期的影響尤為重要。目前,E.tenella的防治主要依靠化學(xué)藥物。沙咪珠利(Ethanamizuril)是上海獸醫(yī)研究所獸用抗感染藥物創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)自主研發(fā)的一種新型三嗪類化合物,具有廣譜、高效、低毒的特點(diǎn)。前期研究表明其抗球蟲效果在第二代裂殖子時(shí)期最為顯著。我們通過研究沙咪珠利對(duì)E.tenella第二代裂殖子蛋白組的影響,期望發(fā)現(xiàn)藥物的作用分子以及潛在的耐藥機(jī)制。結(jié)果如下:1.Label free蛋白質(zhì)組學(xué)研究沙咪珠利對(duì)E.tenella第二代裂殖子蛋白表達(dá)水平的影響,篩選出具有藥物效應(yīng)的目標(biāo)蛋白。液相色譜-質(zhì)譜/串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)對(duì)蛋白進(jìn)行鑒定和定量分析。采用基因本體論(Gene ontology,GO),京都基因和基因組百科全書(Kyoto Encyclopedia of Genes and...

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 柔嫩艾美耳球蟲概述
        1.1.1 簡(jiǎn)介
        1.1.2 發(fā)育史
        1.1.3 流行病學(xué)
        1.1.4 防治措施
    1.2 三嗪類藥物的研究進(jìn)展
        1.2.1 三嗪類藥物的簡(jiǎn)介
        1.2.2 三嗪類藥物作用機(jī)理的研究
    1.3 蛋白組學(xué)研究
    1.4 表面抗原的研究進(jìn)展
    1.5 本研究的目的與意義
第二章 沙咪珠利抗E.tenella第二代裂殖子的蛋白組學(xué)研究
    2.1 材料
        2.1.1 主要儀器和主要試劑
        2.1.2 試驗(yàn)蟲株及藥物
    2.2 方法
        2.2.1 試驗(yàn)動(dòng)物分組
        2.2.2 E.tenella第二代裂殖子的提取和純化
        2.2.3 蛋白質(zhì)樣品制備
        2.2.4 酶解產(chǎn)物的LC-MS/MS分析
        2.2.5 Max Quant的非標(biāo)記分析
        2.2.6 差異表達(dá)蛋白質(zhì)篩選
        2.2.7 生物信息學(xué)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 質(zhì)譜鑒定及差異表達(dá)蛋白的篩選
        2.3.2 GO分析
        2.3.3 KEGG信號(hào)通路富集分析
        2.3.4 PPI網(wǎng)絡(luò)分析
    2.4 討論
    2.5 本章小結(jié)
第三章 沙咪珠利對(duì)E.tenella第二代裂殖子差異表面抗原m RNA水平的影響
    3.1 材料
        3.1.1 主要儀器和試劑
        3.1.2 試驗(yàn)蟲株和試驗(yàn)用藥
    3.2 方法
        3.2.1 試驗(yàn)動(dòng)物分組
        3.2.2 E.tenella第二代裂殖子的制備
        3.2.3 提取E.tenella第二代裂殖子的總RNA
        3.2.4 反轉(zhuǎn)錄m RNA合成c DNA的第一條鏈
        3.2.5 引物設(shè)計(jì)及Real-time PCR
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 提取第二代裂殖子總RNA
        3.3.2 Real-time RCR分析
    3.4 討論
    3.5 本章小結(jié)
第四章 E.tenella第二代裂殖子SAGfm1和SAGfm2 的克隆與表達(dá)
    4.1 材料
        4.1.1 主要儀器和試劑
    4.2 方法
        4.2.1 引物設(shè)計(jì)
        4.2.2 RT-PCR擴(kuò)增
        4.2.3 表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
        4.2.4 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        4.2.5 重組蛋白的純化及鑒定
        4.2.6 多克隆抗體的制備
        4.2.7 檢測(cè)重組蛋白制備多克隆抗體的特異性
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.3.2 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)和純化
        4.3.3 檢測(cè)重組蛋白制備多克隆抗體的特異性
    4.4 討論
    4.5 本章小結(jié)
第五章 沙咪珠利對(duì)E.tenella第二代裂殖子SAGfm1和SAGfm2 蛋白水平的影響
    5.1 材料
        5.1.1 主要儀器和試劑
    5.2 方法
        5.2.1 制備E.tenella第二代裂殖子
        5.2.2 提取E.tenella第二代裂殖子的總蛋白
        5.2.3 Western blot分析沙咪珠利對(duì)SAGfm1和SAGfm2 蛋白水平的影響
        5.2.4 E.tenella第二代裂殖子SAGfm1和SAGfm2 的免疫定位
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 沙咪珠利對(duì)E.tenella第二代裂殖子SAGfm1和SAGfm2 蛋白水平的影響
        5.3.2 E.tenella第二代裂殖子SAGfm1和SAGfm2 的免疫定位
    5.4 討論
    5.5 本章小結(jié)
第六章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄 A
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3835227