為了建立腸出血性大腸桿菌(EHEC)O157的多重PCR檢測(cè)方法,本研究選取調(diào)控基因fusR與n5512,聯(lián)合經(jīng)典的rfbE、stx1和stx2基因,共同作為靶基因,通過對(duì)引物濃度等參數(shù)優(yōu)化,建立了穩(wěn)定性好的檢測(cè)EHEC O157的多重PCR方法。并檢測(cè)了該方法的特異性與敏感性,結(jié)果顯示,該方法對(duì)非O157的產(chǎn)志賀毒素的大腸桿菌、腸致病性大腸桿菌(EPEC)、沙門氏菌、假結(jié)核耶爾森菌等檢測(cè)均為陰性,特異性強(qiáng);對(duì)EHEC基因組DNA的檢測(cè)下限約為2.27×10^-2ng/μL,對(duì)EHEC CFU的檢測(cè)下限約為104cfu/mL。對(duì)人工感染菌的樣品進(jìn)行檢測(cè),增菌前與增菌后的檢測(cè)限分別為:飼料,4×10³cfu/g和4×10^-4cfu/g;土壤,4×103cfu/g和4×10^-2cfu/g;牛肉,8×10-1cfu/g和8×10-3cfu/g;廢水,4×103cfu/g和4×10^-3cfu/g。該方法還能檢出感染了EHEC O157小鼠的糞便。綜上,本研究建立了一種優(yōu)化的EHEC O1...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌株與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.2 主要試劑
    1.3 引物的設(shè)計(jì)與合成
    1.4 基因組DNA的制備
    1.5 多重PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化
    1.6多重PCR特異性試驗(yàn)
    1.7 多重PCR敏感性試驗(yàn)
        1.7.1以細(xì)菌培養(yǎng)物為模板的多重PCR敏感性試驗(yàn)
        1.7.2以基因組DNA為模板的多重PCR敏感性試驗(yàn)
    1.8 多重PCR的重復(fù)性試驗(yàn)
    1.9 多重PCR方法對(duì)人工染菌樣品中EHEC O157的檢測(cè)
        1.9.1飼料、土壤、牛肉、廢水樣品集菌后與增菌后的多重PCR檢測(cè)
        1.9.2糞便樣品集菌后與增菌后的多重PCR檢測(cè)
        1.9.3樣品檢測(cè)限的計(jì)算
2 結(jié)果
    2.1 多重PCR反應(yīng)優(yōu)化結(jié)果
    2.2 多重PCR特異性試驗(yàn)結(jié)果
    2.3 多重PCR敏感性試驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1以細(xì)菌培養(yǎng)物為模板的多重PCR敏感性試驗(yàn)結(jié)果
        2.3.2以基因組DNA為模板的多重PCR敏感性試驗(yàn)結(jié)果
    2.4 多重PCR重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
    2.5 人工染菌樣品中EHEC O157的檢測(cè)
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