根據(jù)巨型艾美耳球蟲Emgam56基因去除信號(hào)肽后的ORF序列和質(zhì)粒pET-28a(+)的酶切位點(diǎn)設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物,以本室保存的重組質(zhì)粒pGEM-T-Emgam56為模板,PCR擴(kuò)增出目的片段,插入質(zhì)粒pET-28a(+)載體中,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-28-Emgam56。測(cè)序正確后轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21,經(jīng)IPTG誘導(dǎo),融合蛋白在大腸桿菌中成功表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物主要以可溶性蛋白的形式存在,大小約為56 KDa。分別以鼠抗重組蛋白rEmGam56多克隆抗體和E maxima雞康復(fù)血清為一抗進(jìn)行Western-blot檢測(cè),結(jié)果顯示重組蛋白具有良好的免疫原性。為研究重組蛋白rEmGam56對(duì)雞的免疫保護(hù)效果,以死亡率、相對(duì)增重率、病變記分減少率、卵囊減少率等作為評(píng)價(jià)指標(biāo),并與重組蛋白rEmGam82-Y和卵囊免疫相比較。結(jié)果顯示,重組蛋白rEmGam56高劑量組(300μg)的平均增重和相對(duì)增重率高于中劑量組(200μg)和低劑量組(100μg),與重組蛋白rEmGam82-Y高劑量組(300μg)的相近,但低于卵囊免疫組,差異顯著(P<0.05);重組蛋白rEmGam56高劑量組的平...

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