發(fā)布時間：2023-05-31 23:35

　　豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一種高度接觸性傳染病,臨床癥狀主要是以母豬的繁殖障礙,仔豬呼吸道癥狀以及哺乳仔豬的高死亡率為特征。豬群會因感染PRRSV后所造成的持續(xù)性感染以及繼發(fā)性感染,而導致豬群的生產(chǎn)性能下降,對養(yǎng)豬業(yè)造成了極大的經(jīng)濟損失,是目前影響?zhàn)B豬業(yè)健康發(fā)展的重要的疫病之一。PRRSV極易發(fā)生變異,流行毒株眾多,而商品化弱毒疫苗的使用,也會導致流行毒與疫苗毒重組現(xiàn)象的發(fā)生,造成PRRS防控難度加大。誘導保護性免疫應答的PRRSV抗原結(jié)構(gòu)仍然不是很清楚,有必要研制PRRSV不同結(jié)構(gòu)蛋白的單克隆抗體,解析PRRSV的抗原結(jié)構(gòu),發(fā)現(xiàn)誘導中和抗體甚至廣譜中和抗體應答的抗原表位,為PRRSV防控產(chǎn)品的研究提供理論依據(jù)。本研究中,利用多種商品化的PRRS弱毒疫苗和實驗室自制流行毒株疫苗免疫豬,以誘導產(chǎn)生較高水平的中和抗體。同時純化全病毒抗原,并用生物素...

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 豬繁殖與呼吸綜合征簡介
        1.1.1 PRRSV的生物學特征
    1.2 PRRSV的遺傳變異
    1.3 PRRSV的致病機制
    1.4 PRRSV的免疫學特性
        1.4.1 PRRS產(chǎn)生的體液免疫應答
        1.4.2 PRRS產(chǎn)生的細胞免疫應答
    1.5 PRRS的預防與控制
    1.6 單個B細胞抗體技術(shù)簡述
    1.7 研究目的與意義
第二章 PRRSV抗原純化與動物免疫試驗
    2.1 試驗材料
        2.1.1 試驗動物
        2.1.2 細胞和毒株
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器
    2.2 試驗方法
        2.2.1 PRRSV全病毒抗原的純化
        2.2.2 生物素標記PRRSV抗原及WB檢測
        2.2.3 試驗動物免疫程序
        2.2.4 靜脈采血
        2.2.5 全血RNA的提取
        2.2.6 血液病毒血癥的測定
        2.2.7 病毒血清微量中和試驗
    2.3 試驗結(jié)果
        2.3.1 蔗糖密度梯度超速離心結(jié)果
        2.3.2 PRRSV病毒粒子電鏡觀察結(jié)果
        2.3.3 Western blot檢測生物素標記PRRSV抗原結(jié)果
        2.3.4 血液病毒血癥的結(jié)果
        2.3.5 病毒血清微量中和試驗結(jié)果
    2.4 討論
第三章 FACS分選PRRSV抗原特異性單個B細胞以及豬源單克隆抗體的表達與鑒定
    3.1 試驗材料
        3.1.1 主要試劑
        3.1.2 主要儀器
    3.2 試驗方法
        3.2.1 豬外周血單核細胞的分離
        3.2.2 FACS分選單個B細胞
        3.2.3 單細胞cDNA分子的制備及PCR擴增
        3.2.4 載體構(gòu)建與抗體質(zhì)粒制備
        3.2.5 小量表達抗體
        3.2.6 間接免疫熒光試驗(IFA)檢測抗體的活性
        3.2.7 表達抗體
        3.2.8 抗體純化
        3.2.9 純化后抗體的分析
        3.2.10 間接免疫熒光試驗(IFA)檢測抗體的反應性
        3.2.11 病毒中和試驗檢測抗體的中和活性
        3.2.12 抗體識別抗原蛋白的鑒別
        3.2.13 Western blot驗證抗體識別抗原蛋白
        3.2.14 分析9株抗體氨基酸序列
    3.3 試驗結(jié)果
        3.3.1 PRRSV特異性B細胞FACS分選結(jié)果
        3.3.2 單個B細胞PCR擴增結(jié)果
        3.3.3 IFA檢測抗體與PRRSV反應性的結(jié)果
        3.3.4 抗體表達純化的鑒定結(jié)果
        3.3.5 抗體反應性檢測結(jié)果
        3.3.6 病毒中和試驗結(jié)果
        3.3.7 Western blot鑒別抗體識別抗原蛋白的結(jié)果
        3.3.8 Western blot驗證抗體識別抗原蛋白的結(jié)果
        3.3.9 抗體可變區(qū)氨基酸比對分析結(jié)果
    3.4 討論
全文總結(jié)
參考文獻
致謝
作者簡介



本文編號：3826229