為探究在奶牛乳腺發(fā)育分化中細(xì)胞-ECM相互作用及相關(guān)整聯(lián)蛋白β1信號(hào)機(jī)制,構(gòu)建包被不同蛋白成分(BSA、LN、Matrigel)作為細(xì)胞培養(yǎng)底物的transwell培養(yǎng)模型,奶牛乳腺上皮細(xì)胞在分化培養(yǎng)液誘導(dǎo)下,檢測(cè)整聯(lián)蛋白β1及其下游信號(hào)分子ILK與Rac1表達(dá)變化。通過(guò)添加AIIB2抗體調(diào)控整聯(lián)蛋白β1活性,分析下游信號(hào)分子ILK與Rac1表達(dá)變化。結(jié)果表明,LN可上調(diào)整聯(lián)蛋白β1-ILK-Rac1途徑提高β-酪蛋白合成分泌,AIIB2阻斷可下調(diào)整聯(lián)蛋白β1下游信號(hào)分子ILK表達(dá),抑制β-酪蛋白合成分泌。研究發(fā)現(xiàn),在分化培養(yǎng)液誘導(dǎo)下,LN可上調(diào)奶牛乳腺上皮細(xì)胞β-酪蛋白合成分泌,這種上調(diào)作用依賴整聯(lián)蛋白β1-ILK通路活性。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 細(xì)胞
        1.1.2 試驗(yàn)試劑
    1.2 方法
        1.2.1 原代奶牛乳腺上皮細(xì)胞CK18鑒定及MYH11陽(yáng)性細(xì)胞檢測(cè)
        1.2.2 不同基質(zhì)上培養(yǎng)細(xì)胞
        1.2.3 細(xì)胞的AIIB2阻斷培養(yǎng)
    1.3 熒光定量PCR
    1.4 蛋白免疫印跡
    1.5 統(tǒng)計(jì)分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 奶牛乳腺上皮細(xì)胞生物學(xué)特性鑒定
    2.2 層粘連蛋白對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞泌乳分化的影響
        2.2.1 層粘連蛋白對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞中整聯(lián)蛋白β1途徑的影響
        2.2.2 層粘連蛋白對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞中β-酪蛋白表達(dá)的影響
    2.3 整聯(lián)蛋白β1活性對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞中泌乳分化的影響
        2.3.1 整聯(lián)蛋β1活性對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞中泌乳相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
        2.3.2 整聯(lián)蛋白β1活性對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞β-酪蛋白合成的影響
3 討論
    3.1 層粘連蛋白對(duì)于奶牛乳腺上皮細(xì)胞泌乳的影響
    3.2 整聯(lián)蛋白β1活性對(duì)于奶牛乳腺上皮細(xì)胞泌乳的影響
4 結(jié)論



本文編號(hào)：3822982