梅花鹿產(chǎn)茸量是茸鹿育種工作中的一項重要指標,決定著茸鹿的經(jīng)濟效應。褪黑激素(MLT)是一種光信號激素,能從多方面影響鹿茸生長,提高鹿茸的年產(chǎn)量。褪黑激素需要與其相應的受體結(jié)合才能發(fā)揮其生物學效應,因此對褪黑激素及其受體(MTNR)進行研究,具有重要的經(jīng)濟效益和生物育種效益。本研究選擇的是在體外離體條件下,分別分離培養(yǎng)梅花鹿鹿茸軟骨細胞和間充質(zhì)細胞,并且通過添加不同濃度水平的褪黑激素作用鹿茸間充質(zhì)細胞,來探究在體外培養(yǎng)條件下不同濃度褪黑激素對鹿茸間充質(zhì)細胞的影響以及褪黑激素發(fā)揮效應的信號通路。 本研究所取樣本來自湖北荊門五三梅花鹿(雙陽品種)鹿場。本研究應用細胞培養(yǎng)、逆轉(zhuǎn)錄-PCR、Western blot技術(shù)、共聚焦顯微定位、流式細胞技術(shù)、MTT法等技術(shù),通過比較幾種不同濃度褪黑激素對鹿茸間充質(zhì)細胞生長和增殖的作用以及其受體在細胞中的表達量,旨在：(1)篩選促進鹿茸間充質(zhì)細胞增殖效果最佳的褪黑激素濃度,為提高鹿茸產(chǎn)量提供依據(jù)；(2)探討褪黑激素及其受體作用的信號通路,為進一步提高鹿茸產(chǎn)量奠定基礎(chǔ)。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下： 1.采用逆轉(zhuǎn)錄-PCR技術(shù)和Western blot技術(shù)檢測了褪...

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
英文縮略語
1 前言
    1.1 梅花鹿簡介
    1.2 梅花鹿鹿茸的介紹
    1.3 影響鹿茸生長的因素
        1.3.1 品種
        1.3.2 年齡
        1.3.3 營養(yǎng)
        1.3.4 光照
        1.3.5 溫度
        1.3.6 濕度
    1.4 褪黑激素的介紹
        1.4.1 MLT的理化性質(zhì)
        1.4.2 MLT的合成
        1.4.3 MLT的代謝
    1.5 褪黑激素的生物學作用
        1.5.1 MLT分泌的節(jié)律性
        1.5.2 MLT對時差與睡眠的影響
        1.5.3 MLT對免疫功能的影響
        1.5.4 MLT的抗腫瘤作用
        1.5.5 MLT對繁殖系統(tǒng)的調(diào)節(jié)
        1.5.6 MLT抗氧化、衰老的作用
    1.6 褪黑激素受體的研究進展
        1.6.1 結(jié)構(gòu)
        1.6.2 分類
        1.6.3 分布
    1.7 作用機制
2 研究的目的與意義
3 材料與方法
    3.1 試驗材料
        3.1.1 樣本的采集
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要溶液
        3.1.4 主要儀器設(shè)備
    3.2 試驗分組
    3.3 試驗方法
        3.3.1 鹿茸增生層細胞的制備與培養(yǎng)
        3.3.2 鹿茸細胞的鑒定
        3.3.3 鹿茸細胞的細胞傳代,細胞凍存與復蘇
        3.3.4 褪黑激素受體在鹿茸間充質(zhì)細胞中的鑒定
        3.3.5 褪黑激素對鹿茸細充質(zhì)細胞的影響
        3.3.6 酶聯(lián)免疫反應檢測
    3.4 統(tǒng)計分析
4 結(jié)果與分析
    4.1 鹿茸增生層細胞的培養(yǎng)和鑒定
        4.1.1 增生層細胞的培養(yǎng)
        4.1.2 增生層細胞的鑒定
    4.2 間充質(zhì)細胞總RNA提取物的質(zhì)量
    4.3 目的基因MT1在轉(zhuǎn)錄水平上的表達
    4.4 MT1蛋白在鹿茸間充質(zhì)細胞中的表達與分布
        4.4.1 Western blot技術(shù)檢測MT1受體蛋白
        4.4.2 MTl蛋白的亞細胞定位
    4.5 細胞增殖的檢測
    4.6 細胞周期的檢測
    4.7 MLT對鹿茸間充質(zhì)細胞激素分泌功能的影響
5 討論
6 小結(jié)
    6.1 主要研究結(jié)果
    6.2 創(chuàng)新之處
參考文獻
致謝



本文編號：3822405