貓泛白細(xì)胞減少癥病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)可以引起一種具有高度傳染性的貓泛白細(xì)胞減少癥。目前,防控該病主要以疫苗接種為主。MicroRNAs(miRNAs)是長度約18～25個核苷酸的單鏈非編碼RNA,大量研究表明miRNAs參與多種細(xì)胞生命活動并在宿主的抗病毒感染過程中扮演重要的角色。但關(guān)于宿主miRNAs對FPV復(fù)制的影響及兩者相互作用的具體機制目前尚無報道。為探索miRNAs參與FPV感染過程的相關(guān)機制,利用高通量測序技術(shù)檢測了FPV感染F81細(xì)胞前后,細(xì)胞miRNAs表達(dá)譜的變化情況。得到了細(xì)胞接種FPV前后的兩個小RNA數(shù)據(jù)庫。對數(shù)據(jù)初步分析,鑒定出792個已知miRNAs成熟體和271個新的miRNAs成熟體,其中包括57個表達(dá)差異顯著的miRNAs。利用熒光定量PCR對隨機篩選的15個miRNAs表達(dá)水平進(jìn)行鑒定,結(jié)果顯示,14個miRNAs的差異水平與高通量測序結(jié)果一致。分析測序結(jié)果并結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn),篩選合成9個miRNAs模擬物。F81細(xì)胞轉(zhuǎn)染miRNAs模擬物或?qū)φ蘸蠼臃NFPV,絕對熒光定量和western blot實驗分析篩...

【文章頁數(shù)】：123 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要符號對照表
第一章 緒論
    1.1 國內(nèi)外研究進(jìn)展
    1.2 貓泛白細(xì)胞減少癥概述
    1.3 細(xì)小病毒科概述
        1.3.1 貓泛白細(xì)胞減少癥病毒特性
        1.3.2 貓泛白細(xì)胞減少癥病毒復(fù)制機制
        1.3.3 細(xì)小病毒編碼蛋白及功能概述
        1.3.4 貓泛白細(xì)胞減少癥病毒致病機理
    1.4 抗病毒先天性免疫
        1.4.1 I型干擾素概述
        1.4.2 細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子概述
    1.5 micro RNAs研究概述
        1.5.1 micro RNAs簡介
        1.5.2 micro RNAs參與抗病毒免疫應(yīng)答
        1.5.3 micro RNAs與細(xì)小病毒
        1.5.4 micro RNAs與轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控
    1.6 目的與意義
第二章 FPV感染F81 細(xì)胞的miRNAs組學(xué)分析及篩選
    2.1 材料與方法
        2.1.1 病毒株和細(xì)胞
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 測序樣品的制備
        2.1.4 樣品總RNA的提取
        2.1.5 高通量測序
        2.1.6 測序數(shù)據(jù)的分析處理
        2.1.7 miRNAs表達(dá)量的驗證
        2.1.8 篩選目標(biāo)miRNAs
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 測序數(shù)據(jù)分析
        2.2.2 miRNAs的鑒定和差異表達(dá)分析
        2.2.3 莖環(huán)qRT-PCR驗證miRNAs的表達(dá)
        2.2.4 miR-92a-1-5p的篩選
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
第三章 轉(zhuǎn)錄因子SP1 上調(diào)miR-92a-1-5p轉(zhuǎn)錄水平的初步研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 病毒株和細(xì)胞
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 細(xì)胞內(nèi)源性miR-92a-1-5p表達(dá)量的檢測
        3.1.4 miR-92a-1-5p上游基因核心序列的鑒定
        3.1.5 雙熒光素酶檢測FPV對 miR-92a-1-5p上游基因序列的影響
        3.1.6 鑒定結(jié)合miR-92a-1-5p上游核心基因序列的轉(zhuǎn)錄因子
        3.1.7 FPV對細(xì)胞內(nèi)源性SP1表達(dá)的影響
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 FPV影響miR-92a-1-5p的表達(dá)
        3.2.2 miR-92a-1-5p上游基因核心序列
        3.2.3 FPV影響miR-92a-1-5p上游基因序列的酶活性
        3.2.4 SP1 促進(jìn)miR-92a-1-5p的表達(dá)
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
第四章 miR-92a-1-5p對 FPV復(fù)制的影響及機制
    4.1 材料與方法
        4.1.1 病毒株和細(xì)胞
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 qRT-PCR檢測miR-92a-1-5p對 FPV mRNA的影響
        4.1.4 Western Blot檢測miR-92a-1-5p對 FPV蛋白表達(dá)的影響
        4.1.5 IFA檢測miR-92a-1-5p對 FPV復(fù)制的影響
        4.1.6 TCID50 實驗檢測miR-92a-1-5p對 FPV復(fù)制的影響
        4.1.7 FPV-BJ04 毒株對I型干擾素的影響
        4.1.8 miR-92a-1-5p對 I型干擾素的影響
        4.1.9 miR-92a-1-5p對 NF-κB通路的影響
        4.1.10 miR-92a-1-5p靶基因的篩選及驗證
        4.1.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 miR-92a-1-5p抑制FPV mRNA表達(dá)
        4.2.2 miR-92a-1-5p抑制FPV蛋白表達(dá)
        4.2.3 miR-92a-1-5p抑制FPV復(fù)制
        4.2.4 FPV-BJ04 毒株對I型干擾素的影響
        4.2.5 miR-92a-1-5p促進(jìn)I型干擾素的表達(dá)
        4.2.6 miR-92a-1-5p經(jīng) NF-κB通路調(diào)控I型干擾素的表達(dá)
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡歷



本文編號：3814917