貓泛白細胞減少癥病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)可以引起一種具有高度傳染性的貓泛白細胞減少癥。目前,防控該病主要以疫苗接種為主。MicroRNAs(miRNAs)是長度約18～25個核苷酸的單鏈非編碼RNA,大量研究表明miRNAs參與多種細胞生命活動并在宿主的抗病毒感染過程中扮演重要的角色。但關于宿主miRNAs對FPV復制的影響及兩者相互作用的具體機制目前尚無報道。為探索miRNAs參與FPV感染過程的相關機制,利用高通量測序技術檢測了FPV感染F81細胞前后,細胞miRNAs表達譜的變化情況。得到了細胞接種FPV前后的兩個小RNA數據庫。對數據初步分析,鑒定出792個已知miRNAs成熟體和271個新的miRNAs成熟體,其中包括57個表達差異顯著的miRNAs。利用熒光定量PCR對隨機篩選的15個miRNAs表達水平進行鑒定,結果顯示,14個miRNAs的差異水平與高通量測序結果一致。分析測序結果并結合相關文獻,篩選合成9個miRNAs模擬物。F81細胞轉染miRNAs模擬物或對照后接種FPV,絕對熒光定量和western blot實驗分析篩...

【文章頁數】：123 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要符號對照表
第一章 緒論
    1.1 國內外研究進展
    1.2 貓泛白細胞減少癥概述
    1.3 細小病毒科概述
        1.3.1 貓泛白細胞減少癥病毒特性
        1.3.2 貓泛白細胞減少癥病毒復制機制
        1.3.3 細小病毒編碼蛋白及功能概述
        1.3.4 貓泛白細胞減少癥病毒致病機理
    1.4 抗病毒先天性免疫
        1.4.1 I型干擾素概述
        1.4.2 細胞因子信號轉導抑制因子概述
    1.5 micro RNAs研究概述
        1.5.1 micro RNAs簡介
        1.5.2 micro RNAs參與抗病毒免疫應答
        1.5.3 micro RNAs與細小病毒
        1.5.4 micro RNAs與轉錄因子調控
    1.6 目的與意義
第二章 FPV感染F81 細胞的miRNAs組學分析及篩選
    2.1 材料與方法
        2.1.1 病毒株和細胞
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 測序樣品的制備
        2.1.4 樣品總RNA的提取
        2.1.5 高通量測序
        2.1.6 測序數據的分析處理
        2.1.7 miRNAs表達量的驗證
        2.1.8 篩選目標miRNAs
    2.2 結果
        2.2.1 測序數據分析
        2.2.2 miRNAs的鑒定和差異表達分析
        2.2.3 莖環(huán)qRT-PCR驗證miRNAs的表達
        2.2.4 miR-92a-1-5p的篩選
    2.3 討論
    2.4 小結
第三章 轉錄因子SP1 上調miR-92a-1-5p轉錄水平的初步研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 病毒株和細胞
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 細胞內源性miR-92a-1-5p表達量的檢測
        3.1.4 miR-92a-1-5p上游基因核心序列的鑒定
        3.1.5 雙熒光素酶檢測FPV對 miR-92a-1-5p上游基因序列的影響
        3.1.6 鑒定結合miR-92a-1-5p上游核心基因序列的轉錄因子
        3.1.7 FPV對細胞內源性SP1表達的影響
    3.2 結果
        3.2.1 FPV影響miR-92a-1-5p的表達
        3.2.2 miR-92a-1-5p上游基因核心序列
        3.2.3 FPV影響miR-92a-1-5p上游基因序列的酶活性
        3.2.4 SP1 促進miR-92a-1-5p的表達
    3.3 討論
    3.4 小結
第四章 miR-92a-1-5p對 FPV復制的影響及機制
    4.1 材料與方法
        4.1.1 病毒株和細胞
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 qRT-PCR檢測miR-92a-1-5p對 FPV mRNA的影響
        4.1.4 Western Blot檢測miR-92a-1-5p對 FPV蛋白表達的影響
        4.1.5 IFA檢測miR-92a-1-5p對 FPV復制的影響
        4.1.6 TCID50 實驗檢測miR-92a-1-5p對 FPV復制的影響
        4.1.7 FPV-BJ04 毒株對I型干擾素的影響
        4.1.8 miR-92a-1-5p對 I型干擾素的影響
        4.1.9 miR-92a-1-5p對 NF-κB通路的影響
        4.1.10 miR-92a-1-5p靶基因的篩選及驗證
        4.1.11 數據統計學分析
    4.2 結果
        4.2.1 miR-92a-1-5p抑制FPV mRNA表達
        4.2.2 miR-92a-1-5p抑制FPV蛋白表達
        4.2.3 miR-92a-1-5p抑制FPV復制
        4.2.4 FPV-BJ04 毒株對I型干擾素的影響
        4.2.5 miR-92a-1-5p促進I型干擾素的表達
        4.2.6 miR-92a-1-5p經 NF-κB通路調控I型干擾素的表達
    4.3 討論
    4.4 小結
第五章 全文結論
參考文獻
附錄
致謝
作者簡歷



本文編號：3814917