本論文研究添加不同濃度葡萄糖對奶牛乳腺上皮細(xì)胞(BMECs))葡萄糖攝取和酪蛋白合成的影響,通過對BMECs活力、葡萄糖攝取相關(guān)基因mRNA表達(dá)量、葡萄糖代謝相關(guān)酶活性、酪蛋白合成相關(guān)基因mRNA表達(dá)量和蛋白表達(dá)量的研究,旨在探尋BMECs葡萄糖的適宜供給模式,初步揭示葡萄糖調(diào)控酪蛋白合成的分子機(jī)制,為調(diào)控奶牛乳成分的合成提供理論依據(jù)。論文一共包含三部分試驗(yàn),試驗(yàn)一在二維培養(yǎng)模式下,研究不同濃度的葡萄糖(0、7、10.5、14、17.5 和 21 mmol/L)對 BMECs 葡萄糖攝取量、ATP 含量、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因mRNA表達(dá)量及葡萄糖代謝相關(guān)酶活性的影響,篩選葡萄糖的適宜添加量。試驗(yàn)采用單因素完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì),將中國荷斯坦奶牛乳腺上皮細(xì)胞純化培養(yǎng)后,選取第2代細(xì)胞,待細(xì)胞生長到80%匯合度時(shí)饑餓處理12h,再向培養(yǎng)基中添加不同濃度的葡萄糖。葡萄糖處理12 h以后,使用試劑盒檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中葡萄糖的含量、ATP的合成量以及己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)的酶活力;用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測BMECs葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)載體1(GLUT1)、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1 引言
    1.1 乳成分概述
        1.1.1 乳糖合成及其調(diào)控
        1.1.2 乳蛋白的合成及調(diào)控
        1.1.3 乳脂肪的合成及調(diào)控
    1.2 葡萄糖對乳合成的調(diào)控
        1.2.1 葡萄糖的攝取
        1.2.2 葡萄糖的代謝
        1.2.3 葡萄糖對乳糖合成的調(diào)控
        1.2.4 葡萄糖對酪蛋白合成的調(diào)控
        1.2.5 葡萄糖對乳脂肪合成的調(diào)控
    1.3 奶牛乳腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)
        1.3.1 奶牛乳腺上皮細(xì)胞的二維培養(yǎng)
        1.3.2 細(xì)胞的三維培養(yǎng)
    1.4 研究目的及意義
    1.5 技術(shù)路線圖
2 試驗(yàn)研究
    2.1 奶牛乳腺上皮細(xì)胞對葡萄糖攝取和代謝的研究
        2.1.1 材料與方法
        2.1.2 結(jié)果
        2.1.3 討論
        2.1.4 小結(jié)
    2.2 二維培養(yǎng)模式下添加葡萄糖對BMECs酪蛋白合成相關(guān)基因表達(dá)的影響
        2.2.1 材料與方法
        2.2.2 結(jié)果
        2.2.3 討論
        2.2.4 小結(jié)
    2.3 三維培養(yǎng)模式下添加葡萄糖對BMECs酪蛋白合成的影響
        2.3.1 材料與方法
        2.3.2 結(jié)果
        2.3.3 討論
        2.3.4 小結(jié)
3 總體討論與總體結(jié)論
    3.1 總體討論
        3.1.1 BMECs對葡萄糖的攝取與代謝
        3.1.2 葡萄糖對BMECs酪蛋白合成的影響
        3.1.3 BMECs不同培養(yǎng)模式的比較
    3.2 總體結(jié)論
    3.3 本論文創(chuàng)新
    3.4 需要進(jìn)一步研究的問題
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡介



本文編號：3814476