發(fā)布時間：2023-05-06 01:46

　　Toll樣受體(Toll-like receptor, TLR)和核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域蛋白(Nucleotide-binding oligo merization domain protein, NOD)是存在于細胞膜上或細胞內(nèi)的模式識別受體,能夠識別病原微生物進而啟動信號通路,使細胞釋放炎癥因子,參與先天性免疫反應(yīng)。成纖維細胞通常是一種不活躍的細胞,在乳腺中主要起到支持乳腺組織結(jié)構(gòu)和修復損傷的作用。但是近年來研究發(fā)現(xiàn),炎癥時成纖維細胞受到某些刺激變得活躍,活化的成纖維細胞持續(xù)釋放炎癥因子,使炎癥由急性轉(zhuǎn)為慢性。研究成纖維細胞免疫的分子作用機制對乳腺炎的防控可能具有重要意義。本研究檢測奶牛乳腺成纖維細胞中TLR和NOD的表達情況,并對細胞中TLR和NOD信號通路進行研究,從而初步揭示乳腺成纖維細胞的在先天性免疫方面的作用,為深入研究奶牛乳腺成纖維細胞免疫學機制提供實驗依據(jù)。1.奶牛乳腺成纖維細胞的分離培養(yǎng)培養(yǎng)原代奶牛乳腺成纖維細胞采用組織塊法。根據(jù)成纖維細胞和上皮細胞對胰酶敏感度不同,差時消化法連續(xù)純化成纖維細胞。每天定時觀察細胞的形態(tài)和生長情況,用純化的成纖維細胞測生長曲線。吉姆薩...

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號說明
第一章 文獻綜述
    1 Toll樣受體概述
        1.1 TLR的結(jié)構(gòu)及分布
        1.2 TLR功能
        1.3 TLR信號通路
            1.3.1 MyD88依賴型途徑
            1.3.2 MyD88非依賴型途徑
    2 NOD概述
        2.1 NOD的結(jié)構(gòu)及分布
        2.2 NOD功能
        2.3 NOD的信號通路
    3 成纖維細胞的免疫相關(guān)作用
    4 成纖維細胞中TLR和NOD表達及功能
    5 研究的目的和意義
第二章 奶牛乳腺成纖維細胞的分離培養(yǎng)
    1 試驗材料
        1.1 試劑
        1.2 儀器
        1.3 材料
        1.4 實驗常用試劑配制
    2 試驗方法
        2.1 奶牛乳腺組織采樣處理
        2.2 組織塊法培養(yǎng)原代乳腺成纖維細胞
        2.3 乳腺成纖維細胞的純化
        2.4 繪制奶牛乳腺成纖維細胞生長曲線圖
        2.5 奶牛乳腺成纖維細胞的凍存與復蘇
        2.6 奶牛乳腺成纖維細胞的形態(tài)鑒定
    3 結(jié)果與分析
        3.1 奶牛乳腺成纖維細胞的原代培養(yǎng)
        3.2 奶牛乳腺成纖維細胞生長曲線圖
        3.3 奶牛乳腺成纖維細胞的凍存及復蘇
        3.4 吉姆薩染色對細胞的形態(tài)鑒定
    4 討論
第三章 奶牛乳腺成纖維細胞中TLR mRNA表達及半定量分析
    1 試驗材料
        1.1 試劑
        1.2 儀器
        1.3 材料
    2 試驗方法
        2.1 引物設(shè)計及合成
        2.2 脾臟組織及奶牛乳腺成纖維細胞總RNA的提取
        2.3 cDNA第1鏈合成
        2.4 PCR反應(yīng)
        2.5 基因半定量分析
        2.6 統(tǒng)計學分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 脾臟中TLR1～TLR10基因RT-PCR
        3.2 TLR1～TLR10在奶牛乳腺成纖維細胞中的表達
        3.3 奶牛乳腺成纖維細胞中TLR1-TLR10表達半定量分析
    4 討論
第四章 奶牛乳腺成纖維細胞中NOD表達及半定量分析
    1 試驗材料
        1.1 試劑
        1.2 儀器
        1.3 材料
    2 試驗方法
        2.1 引物設(shè)計及合成
        2.2 脾臟組織及奶牛乳腺成纖維細胞總RNA的提取
        2.3 cDNA第1鏈合成
        2.4 PCR反應(yīng)
        2.5 基因半定量分析
        2.6 統(tǒng)計學分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 脾臟中NOD1和NOD2基因RT-PCR
        3.2 NOD1和NOD2在奶牛乳腺成纖維細胞中的表達
        3.3 奶牛乳腺成纖維細胞中NOD基因表達半定量分析
    4 討論
第五章 奶牛乳腺成纖維細胞中TLR和NOD信號通路相關(guān)基因及其下游炎癥因子mRNA表達檢測
    1 試驗材料
        1.1 試劑
        1.2 儀器
    2 試驗方法
        2.1 引物設(shè)計及合成
        2.2 奶牛乳腺成纖維細胞總RNA的提取
        2.3 cDNA第1鏈合成
        2.4 PCR反應(yīng)
    3 結(jié)果與分析
        3.1 奶牛乳腺成纖維細胞中TLR和NOD信號通路相關(guān)基因的表達
        3.2 奶牛乳腺成纖維細胞中炎癥因子的表達
    4 討論
第六章 PAMP誘導對奶牛乳腺成纖維細胞中TLR4、NOD2、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表達影響
    1 試驗材料
        1.1 試劑
        1.2 儀器
        1.3 實驗常用試劑配制
    2 試驗方法
        2.1 引物設(shè)計及合成
        2.2 細胞處理
        2.3 lipid A和MDP刺激細胞
        2.4 奶牛乳腺成纖維細胞總RNA的提取
        2.5 cDNA第1鏈合成
        2.6 PCR反應(yīng)
        2.7 基因半定量分析
        2.8 統(tǒng)計學分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 lipid A誘導對奶牛乳腺成纖維細胞中TLR4、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表達影響
        3.2 MDP誘導對奶牛乳腺成纖維細胞中NOD2、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA影響
    4 討論
結(jié)論
參考文獻
致謝



本文編號：3808774