Toll樣受體(Toll-like receptor, TLR)和核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域蛋白(Nucleotide-binding oligo merization domain protein, NOD)是存在于細(xì)胞膜上或細(xì)胞內(nèi)的模式識(shí)別受體,能夠識(shí)別病原微生物進(jìn)而啟動(dòng)信號(hào)通路,使細(xì)胞釋放炎癥因子,參與先天性免疫反應(yīng)。成纖維細(xì)胞通常是一種不活躍的細(xì)胞,在乳腺中主要起到支持乳腺組織結(jié)構(gòu)和修復(fù)損傷的作用。但是近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),炎癥時(shí)成纖維細(xì)胞受到某些刺激變得活躍,活化的成纖維細(xì)胞持續(xù)釋放炎癥因子,使炎癥由急性轉(zhuǎn)為慢性。研究成纖維細(xì)胞免疫的分子作用機(jī)制對(duì)乳腺炎的防控可能具有重要意義。本研究檢測(cè)奶牛乳腺成纖維細(xì)胞中TLR和NOD的表達(dá)情況,并對(duì)細(xì)胞中TLR和NOD信號(hào)通路進(jìn)行研究,從而初步揭示乳腺成纖維細(xì)胞的在先天性免疫方面的作用,為深入研究奶牛乳腺成纖維細(xì)胞免疫學(xué)機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1.奶牛乳腺成纖維細(xì)胞的分離培養(yǎng)培養(yǎng)原代奶牛乳腺成纖維細(xì)胞采用組織塊法。根據(jù)成纖維細(xì)胞和上皮細(xì)胞對(duì)胰酶敏感度不同,差時(shí)消化法連續(xù)純化成纖維細(xì)胞。每天定時(shí)觀察細(xì)胞的形態(tài)和生長(zhǎng)情況,用純化的成纖維細(xì)胞測(cè)生長(zhǎng)曲線。吉姆薩...

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號(hào)說明
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 Toll樣受體概述
        1.1 TLR的結(jié)構(gòu)及分布
        1.2 TLR功能
        1.3 TLR信號(hào)通路
            1.3.1 MyD88依賴型途徑
            1.3.2 MyD88非依賴型途徑
    2 NOD概述
        2.1 NOD的結(jié)構(gòu)及分布
        2.2 NOD功能
        2.3 NOD的信號(hào)通路
    3 成纖維細(xì)胞的免疫相關(guān)作用
    4 成纖維細(xì)胞中TLR和NOD表達(dá)及功能
    5 研究的目的和意義
第二章 奶牛乳腺成纖維細(xì)胞的分離培養(yǎng)
    1 試驗(yàn)材料
        1.1 試劑
        1.2 儀器
        1.3 材料
        1.4 實(shí)驗(yàn)常用試劑配制
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 奶牛乳腺組織采樣處理
        2.2 組織塊法培養(yǎng)原代乳腺成纖維細(xì)胞
        2.3 乳腺成纖維細(xì)胞的純化
        2.4 繪制奶牛乳腺成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)曲線圖
        2.5 奶牛乳腺成纖維細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇
        2.6 奶牛乳腺成纖維細(xì)胞的形態(tài)鑒定
    3 結(jié)果與分析
        3.1 奶牛乳腺成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)
        3.2 奶牛乳腺成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)曲線圖
        3.3 奶牛乳腺成纖維細(xì)胞的凍存及復(fù)蘇
        3.4 吉姆薩染色對(duì)細(xì)胞的形態(tài)鑒定
    4 討論
第三章 奶牛乳腺成纖維細(xì)胞中TLR mRNA表達(dá)及半定量分析
    1 試驗(yàn)材料
        1.1 試劑
        1.2 儀器
        1.3 材料
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 引物設(shè)計(jì)及合成
        2.2 脾臟組織及奶牛乳腺成纖維細(xì)胞總RNA的提取
        2.3 cDNA第1鏈合成
        2.4 PCR反應(yīng)
        2.5 基因半定量分析
        2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 脾臟中TLR1～TLR10基因RT-PCR
        3.2 TLR1～TLR10在奶牛乳腺成纖維細(xì)胞中的表達(dá)
        3.3 奶牛乳腺成纖維細(xì)胞中TLR1-TLR10表達(dá)半定量分析
    4 討論
第四章 奶牛乳腺成纖維細(xì)胞中NOD表達(dá)及半定量分析
    1 試驗(yàn)材料
        1.1 試劑
        1.2 儀器
        1.3 材料
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 引物設(shè)計(jì)及合成
        2.2 脾臟組織及奶牛乳腺成纖維細(xì)胞總RNA的提取
        2.3 cDNA第1鏈合成
        2.4 PCR反應(yīng)
        2.5 基因半定量分析
        2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 脾臟中NOD1和NOD2基因RT-PCR
        3.2 NOD1和NOD2在奶牛乳腺成纖維細(xì)胞中的表達(dá)
        3.3 奶牛乳腺成纖維細(xì)胞中NOD基因表達(dá)半定量分析
    4 討論
第五章 奶牛乳腺成纖維細(xì)胞中TLR和NOD信號(hào)通路相關(guān)基因及其下游炎癥因子mRNA表達(dá)檢測(cè)
    1 試驗(yàn)材料
        1.1 試劑
        1.2 儀器
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 引物設(shè)計(jì)及合成
        2.2 奶牛乳腺成纖維細(xì)胞總RNA的提取
        2.3 cDNA第1鏈合成
        2.4 PCR反應(yīng)
    3 結(jié)果與分析
        3.1 奶牛乳腺成纖維細(xì)胞中TLR和NOD信號(hào)通路相關(guān)基因的表達(dá)
        3.2 奶牛乳腺成纖維細(xì)胞中炎癥因子的表達(dá)
    4 討論
第六章 PAMP誘導(dǎo)對(duì)奶牛乳腺成纖維細(xì)胞中TLR4、NOD2、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表達(dá)影響
    1 試驗(yàn)材料
        1.1 試劑
        1.2 儀器
        1.3 實(shí)驗(yàn)常用試劑配制
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 引物設(shè)計(jì)及合成
        2.2 細(xì)胞處理
        2.3 lipid A和MDP刺激細(xì)胞
        2.4 奶牛乳腺成纖維細(xì)胞總RNA的提取
        2.5 cDNA第1鏈合成
        2.6 PCR反應(yīng)
        2.7 基因半定量分析
        2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 lipid A誘導(dǎo)對(duì)奶牛乳腺成纖維細(xì)胞中TLR4、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表達(dá)影響
        3.2 MDP誘導(dǎo)對(duì)奶牛乳腺成纖維細(xì)胞中NOD2、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA影響
    4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3808774