發(fā)布時(shí)間：2023-04-26 23:03

　　嵴病毒(Kobuvirus)屬于微小RNA病毒科(Picornaviridae),是一種無囊膜的單股正鏈RNA病毒,可感染人和動(dòng)物。嵴病毒屬現(xiàn)包含愛知病毒(Aichi virus, AiV)和牛嵴病毒(Bovine kobuvirus, BKV)。2007年,匈牙利學(xué)者在檢測豬杯狀病毒時(shí)發(fā)現(xiàn)了嵴病毒屬的一個(gè)候選成員—豬嵴病毒(Porcine kobuvirus, PKV)。此后,PKV在歐洲、亞洲和美洲的豬中檢出率都非常高,但其與疾病之間的聯(lián)系尚不清楚。已有報(bào)道愛知病毒會(huì)引起人腸胃炎,BKV可能導(dǎo)致牛的腹瀉,并且研究發(fā)現(xiàn)PKV在具有腹瀉癥狀的豬群中陽性率明顯高于無腹瀉癥狀的豬群,這些提示我們PKV也許是引起豬腹瀉的一個(gè)新病原體。 現(xiàn)在已有大量有關(guān)PKV部分核酸序列的報(bào)道,但關(guān)于全基因組的報(bào)道較少,而全基因組的序列分析有助于人們更好地了解不同毒株之間的進(jìn)化關(guān)系。愛知病毒和BKV分別于1991年和2003年被分離到,但目前還沒有分離出PKV病毒粒子,這使得許多關(guān)于PKV的研究不能進(jìn)行。鑒于以上基礎(chǔ),本研究從豬嵴病毒RT-PCR診斷方法的建立、基因組遺傳進(jìn)化分析和病毒粒子的分離等方面開展了實(shí)...

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 微小RNA病毒的研究進(jìn)展
        1.1.1 微小RNA病毒的病原學(xué)
        1.1.2 微小RNA病毒的生物學(xué)特性
    1.2 嵴病毒的研究進(jìn)展
        1.2.1 嵴病毒的病原學(xué)
        1.2.2 嵴病毒的臨床癥狀與致病機(jī)制
        1.2.3 嵴病毒的基因組結(jié)構(gòu)和功能
        1.2.4 基因組編碼的蛋白及其作用
        1.2.5 嵴病毒的遺傳進(jìn)化研究
        1.2.6 豬嵴病毒的流行病學(xué)研究
    1.3 RACE技術(shù)
    1.4 病毒的分離
第二章 研究目的與意義
第三章 材料與方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)樣品
        3.1.2 菌株與細(xì)胞
        3.1.3 載體與質(zhì)粒
        3.1.4 工具酶及主要試劑
        3.1.5 培養(yǎng)基與抗生素及其配制
        3.1.6 主要緩沖液與相關(guān)試劑及其配制
        3.1.7 感受態(tài)細(xì)胞制備用試劑
        3.1.8 分子生物學(xué)分析軟件
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 樣品處理
        3.2.2 組織樣品、接種病毒的細(xì)胞樣品總RNA的提取
        3.2.3 反轉(zhuǎn)錄
        3.2.4 PCR檢測方法的建立
        3.2.5 豬嵴病毒病毒基因組序列的PCR擴(kuò)增
        3.2.7 限制性內(nèi)切酶酶切反應(yīng)
        3.2.8 PCR產(chǎn)物或酶切產(chǎn)物的電泳檢測
        3.2.9 PCR產(chǎn)物或酶切產(chǎn)物回收與純化
        3.2.10 外源DNA片段與質(zhì)粒載體的連接反應(yīng)
        3.2.11 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備(氯化鈣法)
        3.2.12 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
        3.2.13 質(zhì)粒的制備與鑒定
        3.2.14 重組質(zhì)粒的測序
        3.2.15 病毒的增殖
第四章 結(jié)果與分析
    4.1 豬嵴病毒檢測方法的建立
        4.1.1 PKV引物設(shè)計(jì)
        4.1.2 退火溫度的選擇
        4.1.3 特異性實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.1.4 敏感性實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.1.5 臨床樣品中PKV檢測結(jié)果
        4.1.6 PKV擴(kuò)增產(chǎn)物序列測定和比較分析
    4.2 豬嵴病毒基因組遺傳進(jìn)化分析
        4.2.1 PKV基因組各片段的擴(kuò)增
        4.2.2 PKV基因組各個(gè)片段重組質(zhì)粒的酶切鑒定結(jié)果
        4.2.3 各陽性克隆的測序及拼接結(jié)果
    4.3 基因遺傳進(jìn)化分析結(jié)果
        4.3.1 PKV與其他微小RNA病毒的對(duì)比分析
        4.3.2 PKV基因組進(jìn)化樹分析
    4.4 基因組序列分析結(jié)果
        4.4.1 PKV的核苷酸序列分析
        4.4.2 PKV蛋白的序列分析
    4.5 豬嵴病毒分離鑒定結(jié)果
        4.5.1 PKV的分離
第五章 討論與結(jié)論
    5.1 豬嵴病毒的檢測方法和流行病學(xué)調(diào)查
    5.2 PKV病毒基因組的擴(kuò)增
    5.3 PKV的基因組分析
    5.4 PKV的分離
    5.5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄



本文編號(hào)：3802363