雞致病性大腸埃希菌(Escherichia coli)是引起雞感染的重要病原菌之一,對(duì)養(yǎng)雞業(yè)危害嚴(yán)重。針對(duì)大腸埃希菌耐藥嚴(yán)峻的狀況,加強(qiáng)大腸埃希菌耐藥性研究具有重要意義。本研究以雞源致病性大腸埃希菌徐州分離株為研究對(duì)象,檢測(cè)其耐藥表型和耐藥基因,在構(gòu)建耐藥基因重組菌的基礎(chǔ)上探討了耐藥表型與耐藥基因間的相關(guān)性,從而為臨床用藥提供理論支持,為尋找藥物作用靶點(diǎn),研發(fā)新型抗菌藥物奠定基礎(chǔ)。主要研究?jī)?nèi)容包括：1.雞致病性大腸埃希菌的分離鑒定從4批疑似患大腸桿菌病病雞體內(nèi)分離鑒定致病性大腸埃希菌,作為后續(xù)試驗(yàn)菌株。采用常規(guī)細(xì)菌分離培養(yǎng)方法結(jié)合人工感染試驗(yàn)從病雞肝臟分離獲得2株致病菌,分別命名為CE和SE菌株。根據(jù)其染色特性、菌落特征和生化特性進(jìn)行初步鑒定；然后進(jìn)行16S rDNA基因PCR擴(kuò)增和序列分析。結(jié)果顯示,2株分離菌為G短桿菌,散在排列；在伊紅-美藍(lán)(EMB)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)出典型的具有金屬光澤的墨綠色菌落；生化特性符合《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》中大腸埃希菌屬(Escherichia sp.)細(xì)菌的特性。分離菌株16S rDNA基因大小分別為1 502 bp和1 503 bp,與大腸埃希菌標(biāo)準(zhǔn)株(...

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
文獻(xiàn)綜述
引言
1 材料與方法
    1.1 工程菌與質(zhì)粒
    1.2 主要試劑
    1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.4 主要培養(yǎng)基與溶液配制
        1.4.1 主要培養(yǎng)基
        1.4.2 瓊脂糖凝膠電泳所需溶液
        1.4.3 蛋白電泳檢測(cè)溶液
        1.4.4 蛋白誘導(dǎo)表達(dá)所需溶液
    1.5 主要儀器
    1.6 雞致病性大腸埃希菌的分離鑒定
        1.6.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)與純化
        1.6.2 細(xì)菌鑒定
        1.6.3 細(xì)菌人工感染試驗(yàn)
    1.7 雞致病性大腸埃希菌的耐藥性分析
        1.7.1 耐藥表型分析
        1.7.2 耐藥基因檢測(cè)及其生物信息學(xué)分析
    1.8 耐藥基因重組菌的構(gòu)建與表達(dá)
        1.8.1 耐藥基因的PCR擴(kuò)增
        1.8.2 耐藥基因重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.8.3 重組表達(dá)質(zhì)粒的鑒定
        1.8.4 耐藥基因重組菌的表達(dá)與產(chǎn)物分析
    1.9 耐藥基因與耐藥表型相關(guān)性分析
        1.9.1 耐藥重組菌的耐藥表型分析
        1.9.2 抗菌藥物對(duì)耐藥重組菌生長(zhǎng)的影響
2 結(jié)果與分析
    2.1 細(xì)菌分離與鑒定
        2.1.1 分離菌的表型特征
        2.1.2 細(xì)菌16S rDNA鑒定結(jié)果
        2.1.3 細(xì)菌人工感染結(jié)果
    2.2 大腸埃希菌分離株的耐藥表型
    2.3 大腸埃希菌分離株攜帶的耐藥基因
    2.4 耐藥基因的生物信息學(xué)分析
        2.4.1 β-類酰胺類耐藥基因Bla-TEM的生物信息學(xué)分析
        2.4.2 氨基糖苷類耐藥基因Aac(3)的生物信息學(xué)分析
        2.4.3 多重耐藥基因AcrA的生物信息學(xué)分析
        2.4.4 四環(huán)素類耐藥基因TetA的生物信息學(xué)分析
    2.5 重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
        2.5.1 Bla-TEM、Aac(3)和TetA基因的PCR擴(kuò)增
        2.5.2 重組表達(dá)質(zhì)粒的鑒定
        2.5.3 重組融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
    2.6 耐藥基因與細(xì)菌耐藥的相關(guān)性分析
        2.6.1 重組前后E.coli BL21(DE3)的耐藥表型
        2.6.2 抗菌藥物對(duì)重組前后E.coli BL21(DE3)生長(zhǎng)的影響
3 討論
    3.1 雞源大腸埃希菌的致病性及耐藥狀況
    3.2 耐藥基因與耐藥表型的相關(guān)性分析
    3.3 耐藥基因表達(dá)的研究意義
4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3800295