骨骼肌占產(chǎn)肉動(dòng)物軀體的40%,是動(dòng)物軀體中最重要的組成部分,也是影響肌肉品質(zhì)的重要因素之一,因而影響肉質(zhì)生產(chǎn)的骨骼肌基因是家畜分子育種工作中重要的候選基因。肌鈣蛋白12型(TNNI2)基因和肌鈣蛋白T1 (TNNTl)作為快骨骼肌基因,在動(dòng)物骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中起著重要的調(diào)控作用,是影響動(dòng)物屠宰性能的重要功能基因：肌鈣蛋白T2 (TNNT2)作為心肌亞型在影響心肌組織的正�；顒�(dòng)方面具有很大的研究?jī)r(jià)值。本研究運(yùn)用RT-PCR結(jié)合克隆測(cè)序方法分別獲得了天府肉羊TNNT1、TNN12和TNNT2基因的全編碼區(qū)序列。結(jié)果顯示：TNNT1基因CDS區(qū)長(zhǎng)度是759 bp,編碼252個(gè)氨基酸,得到的蛋白序列含有一個(gè)保守結(jié)構(gòu)域,7個(gè)磷酸化位點(diǎn),且該蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)只具有α-螺旋和無(wú)規(guī)則卷曲,沒(méi)有延伸片段,提交NCBI獲得登錄號(hào)：KF939315; TNNT2基因具有較長(zhǎng)的CDS區(qū)858 bp,編碼285個(gè)氨基酸,蛋白序列含有15個(gè)磷酸化位點(diǎn)和一個(gè)保守結(jié)構(gòu)域,蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)主要為無(wú)規(guī)則卷曲和α-螺旋,提交NCBI得到登錄號(hào)KF939316；克隆出天府肉羊的TNNI2基因,在NBCI數(shù)據(jù)庫(kù)中blast,發(fā)現(xiàn)...

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
常用詞語(yǔ)縮寫(xiě)
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 TNNT1和TNNT2基因的研究進(jìn)展
        1.1.1 TNNT基因的結(jié)構(gòu)
        1.1.2 TNNT基因的進(jìn)展
    1.2 TNNI2基因的研究進(jìn)展
        1.2.1 TNNI2基因的簡(jiǎn)述
        1.2.2 TNNI2基因的研究現(xiàn)狀
    1.3 本研究的目的意義
2 材料和方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物和樣品采集
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.3 試驗(yàn)試劑
        2.1.4 試劑配制
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 總RNA的提取
        2.2.2 提取RNA濃度的檢測(cè)
        2.2.3 cDNA合成
        2.2.4 試驗(yàn)引物的設(shè)計(jì)
        2.2.5 TNNT1、TNNT2和TNNI2基因的克隆及測(cè)序
        2.2.6 熒光定量PCR
        2.2.7 蛋白質(zhì)免疫雜交(Western Blot)
3 結(jié)果與分析
    3.1 總RNA檢測(cè)
    3.2 TNNT1、TNNT2和TNNI2基因克隆與序列分析
        3.2.1 TNNT1基因RT-PCR結(jié)果
        3.2.2 TNNT1基因的克隆測(cè)序
        3.2.3 TNNI1序列比對(duì)結(jié)果
        3.2.4 構(gòu)建TNNT1進(jìn)化樹(shù)
        3.2.5 TNNT1蛋白理化性質(zhì)
        3.2.6 TNNT2基因RT-PCR結(jié)果
        3.2.7 TNNT2基因的克隆測(cè)序
        3.2.8 TNNT2序列比對(duì)結(jié)果
        3.2.9 構(gòu)建TNNT2進(jìn)化樹(shù)
        3.2.10 TNNT2蛋白理化性質(zhì)
        3.2.11 TNNI2基因RT-PCR結(jié)果
        3.2.12 TNNI2基因的克隆測(cè)序
        3.2.13 TNNI2序列比對(duì)結(jié)果
        3.2.14 TNNI2進(jìn)化樹(shù)的構(gòu)建
        3.2.15 TNNI2氨基酸序列分析
    3.3 TNNT1、TNNT2和TNNI2基因在mRNA水平的表達(dá)量
        3.3.1 定量引物的驗(yàn)證
        3.3.2 目的基因與內(nèi)參基因的熔解曲線和標(biāo)準(zhǔn)曲線
        3.3.3 TNNT1、TNNT2和TNNI2基因在組織中表達(dá)情況
    3.4 TNNT1蛋白在組織中表達(dá)差異
    3.5 TNNT1在組織中蛋白表達(dá)與mRNA水平表達(dá)的相關(guān)性分析
4 討論
    4.1 克隆cDNA序列分析
    4.2 TNNT1、TNNT2和TNNI2蛋白結(jié)構(gòu)和功能分析
    4.3 TNNT1、TNNT2和TNNI2基因的組織表達(dá)分析
        4.3.1 TNNT1基因的熒光定量表達(dá)分析
        4.3.2 TNNT2基因的熒光定量表達(dá)分析
        4.3.3 TNNI2基因的組織表達(dá)分析
    4.4 TNNT1蛋白的表達(dá)分析
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3798281