為了探討綿羊肺炎支原體NM2010株假定P60樣脂蛋白用于制備基因工程亞單位疫苗的可能性,試驗運用ExPASy、SignalP 4.0、TMHMM 2.0、SOPMA、 PSORT 6.4、IEDB、BlastP、Hcluster_sg、Muscle等生物信息學(xué)軟件,對綿羊肺炎支原體NM2010株P(guān)60基因編碼蛋白的理化性質(zhì)、跨膜區(qū)、信號肽、二級結(jié)構(gòu)、亞細(xì)胞定位、B細(xì)胞抗原表位、蛋白功能和基因家族進(jìn)行預(yù)測分析。利用人工合成方法獲得P60成熟肽編碼區(qū)基因序列,并克隆到表達(dá)載體pET-32a(+)上進(jìn)行原核表達(dá)及Western-blot分析。結(jié)果表明:綿羊肺炎支原體NM2010株P(guān)60基因編碼蛋白的二級結(jié)構(gòu)以α-螺旋和隨機卷曲為主,其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定,可溶性較高;該編碼蛋白有信號肽,亞細(xì)胞定位在外膜,可能是一種外膜蛋白,具有較好的抗原性;參與綿羊肺炎支原體煙酸和煙酰胺代謝途徑,與綿羊肺炎支原體SC01株的GL000100(WP₀10321430.1)、豬肺炎支原體7448株的0353(WP₀11290189)屬于同一家族,均為P60樣...

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【文章目錄】：
1 材料
    1.1 質(zhì)粒和血清
    1.2 主要試劑
2 方法
    2.1 P60基因的生物信息學(xué)分析
        2.1.1 假定P60樣脂蛋白理化性質(zhì)分析
        2.1.2 信號肽與跨膜區(qū)預(yù)測
        2.1.3 二級結(jié)構(gòu)預(yù)測
        2.1.4 亞細(xì)胞定位預(yù)測
        2.1.5 B細(xì)胞抗原表位預(yù)測
        2.1.6 假定P60樣脂蛋白功能預(yù)測
        2.1.7 基因家族預(yù)測
    2.2 P60基因序列的人工合成
    2.3 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
    2.4 重組蛋白的Western-blot分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 P60基因的生物信息學(xué)分析
        3.1.1 假定P60樣脂蛋白理化性質(zhì)分析
        3.1.2 信號肽與跨膜區(qū)預(yù)測
        3.1.3 二級結(jié)構(gòu)預(yù)測
        3.1.4 亞細(xì)胞定位預(yù)測
        3.1.5 B細(xì)胞抗原表位預(yù)測
        3.1.6 假定P60樣脂蛋白功能預(yù)測
        3.1.7 基因家族預(yù)測
    3.2 P60基因序列的人工合成
    3.3 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
    3.4 重組蛋白的Western-blot分析
4 討論與結(jié)論



本文編號：3790498