為建立犬腺病毒(CAV)和犬細(xì)小病毒(CPV)雙重?zé)晒舛縋CR檢測方法,本研究根據(jù)GenBank中已登錄的CAV Hexon基因序列和CPV VP2基因序列,設(shè)計(jì)了2對特異性引物和2條Taq Man探針。經(jīng)過條件優(yōu)化建立了檢測CAV和CPV的雙重TaqMan熒光定量PCR檢測方法。結(jié)果顯示,以含有CAV Hexon基因和CPV VP2基因的重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品為模板繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,其相關(guān)系數(shù)(R²)均大于0.990,CAV和CPV熒光定量PCR均具有良好的線性關(guān)系。特異性試驗(yàn)結(jié)果顯示,該方法僅對CAV-I型、CAV-II型和CPV檢測結(jié)果為陽性,而對犬瘟熱病毒、犬副流感病毒和犬冠狀病毒檢測結(jié)果均為陰性,表明其特異性強(qiáng)。該方法的敏感性檢測結(jié)果顯示其檢測下限為10拷貝/μL。重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果顯示該方法的組內(nèi)和組間變異系數(shù)均小于2%,表明該方法重復(fù)性好。利用普通PCR方法與本實(shí)驗(yàn)建立的方法分別對感染CAV(10份)和CPV(27份)的犬模擬病料樣品進(jìn)行檢測,兩種方法對CAV和CPV檢測的符合率分別可達(dá)100%和96.30%。本研究建立的熒光定量PCR檢測方法具有快速、敏感、準(zhǔn)確...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料
    1.2引物、探針的設(shè)計(jì)與合成
    1.3 重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的構(gòu)建與鑒定
    1.4 雙重?zé)晒舛縋CR檢測方法反應(yīng)條件的優(yōu)化
    1.5 雙重?zé)晒舛縋CR標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
    1.6 特異性試驗(yàn)
    1.7 敏感性試驗(yàn)
    1.8 重復(fù)性試驗(yàn)
    1.9 臨床模擬樣品檢測
2 結(jié)果
    2.1 質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的構(gòu)建與鑒定
    2.2 雙重?zé)晒舛縋CR反應(yīng)條件的優(yōu)化及標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
    2.3 特異性試驗(yàn)結(jié)果
    2.4 敏感性試驗(yàn)結(jié)果
    2.5 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
    2.6 臨床模擬樣品檢測結(jié)果
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本文編號：3780305