自2010年4月以來，以引起蛋鴨產(chǎn)蛋下降為特征的鴨坦布蘇病毒病的爆發(fā)，給我國養(yǎng)鴨業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。目前，該病已經(jīng)在我國大部分養(yǎng)鴨地區(qū)流行。目前，尚無商品化的鴨坦布蘇病毒病疫苗用來預防該病。 在鴨坦布蘇病毒病在我國發(fā)生的初期，本課題組就分離到了引起該病的病毒，鴨坦布蘇病毒FX2010株。為了獲得鴨坦布蘇病毒的弱毒株并且尋找一些與病毒毒力致弱相關的關鍵位點，我們將鴨坦布蘇病毒FX2010株在雞胚成纖維細胞（CEF）上進行了連續(xù)傳代培養(yǎng)。病毒傳代培養(yǎng)至第3代以后即出現(xiàn)明顯的細胞病變，而且隨著傳代次數(shù)增多，病毒接種后24-36小時就出現(xiàn)細胞病變。這些結果表明，連續(xù)傳代培養(yǎng)使病毒逐漸適應了CEF細胞。鴨坦布蘇病毒FX2010株在CEF上傳173代后，用有限稀釋法進行了5次純化，然后繼續(xù)在CEF上傳代2次至第180代，獲得了FX2010-180P株。FX2010-180P接種SPF雞胚后，發(fā)現(xiàn)該毒株對雞胚的致病力減弱了。 為了探討鴨坦布蘇病毒奉賢分離株（FX2010）在CEF上的傳代病毒FX2010-180P對鴨的致病力，依次進行了四次動物感染試驗。（1）將FX2010和FX2010-180...

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要 Abstract 第一章 引言
1.1 鴨坦布蘇病毒概述
1.2 鴨坦布蘇病毒的形態(tài)結構
1.3 鴨坦布蘇病毒在細胞內(nèi)的復制
1.4 鴨坦布蘇病毒的培養(yǎng)特性
1.5 鴨坦布蘇病毒的流行病學
1.6 鴨坦布蘇病毒的臨床癥狀與病理特征
    1.6.1 臨床癥狀
    1.6.2 病理特征
1.7 鴨坦布蘇病毒的診斷
    1.7.1 病毒分離鑒定
    1.7.2 血清學檢測
    1.7.3 分子生物學診斷方法
1.8 鴨坦布蘇病毒的防控
1.9 研究的目的及意義 第二章 鴨坦布蘇病毒在雞胚成纖維細胞上的傳代培養(yǎng)
摘要
2.1 材料
    2.1.1 病毒
    2.1.2 細胞
    2.1.3 主要儀器
2.2 方法
    2.2.1 FX2010 在 CEF 上的傳代培養(yǎng)
    2.2.2 病毒的克隆純化
    2.2.3 傳代毒毒價測定
    2.2.4 病毒對雞胚的致病力測定
2.3 實驗結果
    2.3.1 FX2010 在 CEF 上的傳代培養(yǎng)
    2.3.2 病毒克隆純化結果
    2.3.3 傳代毒毒價測定
    2.3.4 病毒對雞胚的致病力試驗的測定結果
2.4 討論 第三章 鴨坦布蘇病毒 FX2010-180P 毒對鴨的致病力
摘要
3.1 材料
    3.1.1 病毒和細胞
    3.1.2 試驗動物
3.2 方法
    3.2.1 雛鴨鼻腔感染病毒
    3.2.2 雛鴨肌肉注射感染病毒
    3.2.3 產(chǎn)蛋鴨肌肉注射感染病毒
    3.2.4 病毒感染雛鴨引起的病毒血癥
    3.2.5 熒光定量 PCR
3.3 結果
    3.3.1 鼻腔感染病毒對雛鴨的致病力
    
3.3.1.1 臨床表現(xiàn)
    
3.3.1.2 剖檢病變
    
3.3.1.3 病理變化
    
3.3.1.4 病毒分離
    3.3.2 肌肉注射病毒對雛鴨的致病力
    
3.3.2.1 臨床表現(xiàn)
    
3.3.2.2 剖檢病變
    
3.3.2.3 病理變化
    
3.3.2.4 病毒分離
    3.3.3 肌肉注射病毒對產(chǎn)蛋鴨的致病力
    
3.3.3.1 臨床表現(xiàn)
    
3.3.3.2 剖檢病變
    
3.3.3.3 病理變化
    
3.3.3.4 病毒分離
    3.3.4 病毒感染鴨引起的病毒血癥
3.4 討論
    3.4.1 病毒對雛鴨致病力的評價指標
    3.4.2 剖檢時間
    3.4.3 病毒對產(chǎn)蛋鴨致病力的評價指標
    3.4.4 傳代病毒的致病力減弱
    3.4.5 關于感染途徑 第四章 鴨坦布蘇病毒 FX2010-180P 基因序列測定及分析
摘要
4.1 材料
    4.1.1 病毒
    4.1.2 主要試劑和儀器
    4.1.3 引物設計與合成
4.2 方法
    4.2.1 病毒 RNA 提取和 cDNA 合成
    4.2.2 病毒全基因的 PCR 擴增
    4.2.3 PCR 產(chǎn)物凝膠回收與純化
    4.2.4 目的片段的連接轉化
    4.2.5 陽性克隆的鑒定和序列測定
    4.2.6 FX2010-180P 株序列分析
4.3 結果及分析
    4.3.1 基因變異氨基酸突變情況
    4.3.2 基因變異未導致氨基酸突變情況
    4.3.3 病毒遺傳變異
4.4 討論 第五章 全文結論 參考文獻 致謝 作者簡歷



本文編號：3778591