豬繁殖與呼吸綜合征（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndromevirus，PRRSV）引起的一種高度傳染性疾病，可導(dǎo)致妊娠母豬流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎、木乃伊胎等繁殖性能障礙以及各年齡段豬的呼吸系統(tǒng)功能障礙。 2006年我國發(fā)生的“豬高熱綜合征”(porcine high fever syndrome, PHFS)，經(jīng)鑒定其病原為NSP2基因高變區(qū)發(fā)生了不連續(xù)的90bp缺失的高致病PRRSV（HP-PRRSV）。最新研究表明高致病性PRRSV除具有不連續(xù)90bp的缺失情況以外，還在與本缺失區(qū)域相近的位置存在有36bp或57bp的缺失情況（以下將這幾種缺失情況分別稱為90bp缺失、36bp缺失和57bp缺失）。本研究建立一種鑒別不同變異株的RT-PCR方法，用該方法對目前PRRSV不同變異毒株的流行情況進行調(diào)查研究，以摸清臨床PRRSV變異毒株的流行情況。 根據(jù)本實驗室的研究結(jié)果及GenBank上已公布的序列，設(shè)計引物，...

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【學(xué)位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 病原學(xué)
    1.2 分子生物學(xué)特征
    1.3 蛋白組學(xué)特征
        1.3.1 PRRSV 的非結(jié)構(gòu)蛋白
        1.3.2 PRRSV 的結(jié)構(gòu)蛋白
            1.3.2.1 次要結(jié)構(gòu)蛋白
            1.3.2.2 GP5 蛋白
            1.3.2.3 M 蛋白
            1.3.2.4 N 蛋白
    1.4 流行病學(xué)
    1.5 致病力
    1.6 PRRSV 的致病機制
    1.7 組織病理學(xué)變化
    1.8 PRRSV 遺傳變異
    1.9 診斷
        1.9.1 血清學(xué)檢測
            1.9.1.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA)
            1.9.1.2 血清中和試驗(SNT)
            1.9.1.3 間接熒光抗體試驗(IFA)
            1.9.1.4 免疫過氧化物酶單層試驗(IPMA)
        1.9.2 分子生物學(xué)檢測
    1.10 PRRSV 的防治
        1.10.1 建立防控部門，做好保障工作
        1.10.2 做好宣傳工作，普及科學(xué)防治知識
        1.10.3 密切監(jiān)測疫情，及時準確掌握疫情動態(tài)
        1.10.4 結(jié)合實際，采取預(yù)防措施
            1.10.4.1 提高飼養(yǎng)管理水平，改善豬舍環(huán)境
            1.10.4.2 重視引種，凈化豬群
            1.10.4.3 科學(xué)制定消毒程序，防止病原菌擴散
            1.10.4.4 嚴抓疫苗免疫，提高豬只抵抗力
    1.11 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料和儀器
        2.1.1 樣品
        2.1.2 載體、菌株與細胞
        2.1.3 試劑
        2.1.4 主要設(shè)備及儀器
    2.2 PRRSV 不同變異株鑒別診斷方法的建立
        2.2.1 病毒增殖
            2.2.1.1 細胞系 Marc-145 的培養(yǎng)及傳代
            2.2.1.2 病毒接種
        2.2.2 引物設(shè)計
        2.2.3 病料及血清樣品 RNA 提取
        2.2.4 RT-PCR 反應(yīng)
        2.2.5 套式 PCR 反應(yīng)
        2.2.6 套式 PCR 產(chǎn)物的克隆及序列分析鑒定
            2.2.6.1 PCR 產(chǎn)物純化回收
            2.2.6.2 PCR 產(chǎn)物與克隆載體 pJET1.2 連接反應(yīng)
            2.2.6.3 用氯化鈣制備感受態(tài)細胞 TOP10
            2.2.6.4 轉(zhuǎn)化反應(yīng)
            2.2.6.5 重組質(zhì)粒 DNA 的提取
            2.2.6.6 重組質(zhì)粒 DNA 的 PCR 鑒定
            2.2.6.7 重組質(zhì)粒 DNA 酶切鑒定
            2.2.6.8 重組質(zhì)粒的測序驗證
        2.2.7 方法檢驗
            2.2.7.1 特異性試驗
            2.2.7.2 重復(fù)性試驗
            2.2.7.3 敏感性試驗
            2.2.7.4 方法應(yīng)用檢驗
    2.3 流行性病學(xué)調(diào)查
        2.3.1 材料方法
        2.3.2 技術(shù)路線
        2.3.3 RNA 濃度測定
        2.3.4 RT-PCR 反應(yīng)
        2.2.5 套式 PCR 反應(yīng)
3 結(jié)果
    3.1 標準毒 RNA 濃度測定表
    3.2 PRRSV 經(jīng)典株與高致病毒株單獨感染與混合感染檢測圖
    3.3 標準毒株重組質(zhì)粒 PCR 及酶切鑒定
    3.4 重組質(zhì)粒的測序驗證
    3.5 方法檢驗
        3.5.1 特異性試驗
        3.5.2 重復(fù)性試驗
        3.5.3 敏感性試驗
    3.6 方法應(yīng)用
        3.6.1 樣品檢測
        3.6.2 PCR 產(chǎn)物重組質(zhì)粒鑒定
        3.6.3 測序驗證
    3.7 流行性病學(xué)調(diào)查
        3.7.1 樣品 RNA 濃度測定表
        3.7.2 流行性病學(xué)調(diào)查
        3.7.3 流行性病學(xué)調(diào)查結(jié)果統(tǒng)計
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻
致謝



本文編號：3777426