為了分析山羊痘病毒THx株069基因的分子特征及其編碼蛋白的生物學(xué)功能,本試驗應(yīng)用PCR技術(shù)對069基因進(jìn)行擴(kuò)增,并構(gòu)建原核表達(dá)載體,經(jīng)測序鑒定后用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)其蛋白,應(yīng)用SDS-PAGE和Western blot進(jìn)行蛋白鑒定。用DNAStar及Mega軟件對GenBank登錄的24個該基因參考序列進(jìn)行同源性比對并作遺傳進(jìn)化樹分析;同時采用生物信息學(xué)分析方法對069蛋白信號肽、跨膜結(jié)構(gòu)、糖基化位點(diǎn)、磷酸化位點(diǎn)、抗原決定簇、親水性、二級及三級空間結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測。結(jié)果表明:GTPV-069號基因全長為573 bp,與參考株GTPV-pellor相似度高達(dá)97.19%,經(jīng)同源性比對與遺傳進(jìn)化樹分析發(fā)現(xiàn),山羊痘病毒THx株069基因序列與綿羊痘親緣關(guān)系較近,在同一分支上,與疙瘩皮膚病和其他山羊痘親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。SDS-PAGE鑒定表明069蛋白大量表達(dá)于上清中,條帶清晰。Western blot結(jié)果證明069蛋白與His標(biāo)簽確實(shí)進(jìn)行了融合表達(dá);生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)GTPV-069蛋白無信號肽、含有跨膜結(jié)構(gòu),跨膜區(qū)在29～51 aa之間,為典型的膜蛋白。069蛋白含有8個抗原決定簇、1個糖基化位點(diǎn)...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 毒株、菌株及載體
    1.2 主要藥品及試劑
    1.3 pET42b-069克隆載體的構(gòu)建
        1.3.1 引物設(shè)計與合成
        1.3.2 GTPV基因組的提取
        1.3.3 GTPV-069基因的PCR擴(kuò)增
        1.3.4 069基因與原核表達(dá)載體的連接與鑒定
    1.4 目的基因069號核苷酸及氨基酸序列分析
    1.5 GTPV-069號蛋白表達(dá)鑒定
    1.6 GTPV-069蛋白的生物信息學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 PCR擴(kuò)增GTPV-069基因
    2.2 GTPV-069菌液PCR鑒定結(jié)果
    2.3 GTPV-069重組質(zhì)粒雙酶切鑒定結(jié)果
    2.4 GTPV-069蛋白SDS-PAGE電泳結(jié)果
    2.5 GTPV-069 Western blot檢測結(jié)果
    2.6 GTPV-069目的基因序列
    2.7 GTPV-THx株069基因遺傳進(jìn)化特征分析
    2.8 GTPV-069生物信息學(xué)分析結(jié)果
        2.8.1 信號肽及跨膜結(jié)構(gòu)的預(yù)測結(jié)果
        2.8.2 糖基化位點(diǎn)、磷酸化位點(diǎn)和抗原決定簇的預(yù)測結(jié)果
        2.8.3 蛋白質(zhì)抗原指數(shù)和β-轉(zhuǎn)角的預(yù)測結(jié)果
        2.8.4 蛋白質(zhì)親水性和柔韌性的預(yù)測
        2.8.5 蛋白二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)的分析預(yù)測
3 討論



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