體細(xì)胞核移植技術(shù)對(duì)于體外胚胎的生產(chǎn)具有重要的意義,但是體細(xì)胞核移植成功率非常低,影響了該技術(shù)的實(shí)際應(yīng)用。目前認(rèn)為體細(xì)胞核移植效率低的主要原因是供體細(xì)胞的不完全重編程。科學(xué)家們已經(jīng)嘗試使用DNA甲基化酶抑制劑和組蛋白去乙�；敢种苿┨幚砗艘浦补w細(xì)胞或胚胎,從而提高表觀(guān)遺傳重編程的程度。本試驗(yàn)用DNA甲基化酶抑制劑5-氮-2-脫氧胞苷(5-aza-dC)和組蛋白去乙酰化酶抑制劑丁酸鈉(Sodium butyrate, NaBu)處理水牛成纖維細(xì)胞,檢測(cè)細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)、周期和凋亡等,并移植到黃牛卵母細(xì)胞中,觀(guān)察胚胎發(fā)育情況,從而篩選兩種試劑處理供體細(xì)胞的最佳處理方式,得到如下結(jié)果與結(jié)論： 1.不同濃度的NaBu對(duì)水牛成纖維細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)、細(xì)胞周期和凋亡的影響 用0、0.5、1.0、2.0、2.5和3.0mmol/L NaBu處理水牛成纖維細(xì)胞,檢測(cè)細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)、周期和凋亡,確定處理細(xì)胞的最佳濃度。結(jié)果顯示：0.5和1.0mmol/L NaBu處理的細(xì)胞形態(tài)正常,2.0、2.5和3.0mmol/L NaBu處理的細(xì)胞變大變長(zhǎng),并出現(xiàn)大量死亡；隨著NaBu濃度的升高,對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用增強(qiáng),...

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 哺乳動(dòng)物體細(xì)胞核移植研究進(jìn)展
        1.1 異種克隆研究進(jìn)展
    2 影響核移植效率的因素
        2.1 供體細(xì)胞的選擇
        2.2 供體細(xì)胞的周期狀態(tài)
        2.3 供體細(xì)胞的細(xì)胞系
    3 體細(xì)胞核移植表觀(guān)遺傳修飾研究進(jìn)展
        3.1 DNA甲基化
        3.2 組蛋白乙�；�
        3.3 X染色體失活
        3.4 基因組印記
        3.5 端粒和端粒酶
    4 DNA甲基化與體細(xì)胞核移植
        4.1 DNA甲基化酶抑制劑5-aza-dC
    5 組蛋白乙�；c體細(xì)胞核移植
    6 研究目的與意義
第二章 丁酸鈉(NaBu)對(duì)供體細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)、周期和凋亡的影響
    1 材料和方法
        1.1 試驗(yàn)材料
            1.1.1 主要儀器
            1.1.2 試劑
        1.2 試驗(yàn)方法
            1.2.1 水牛、黃牛耳成纖維細(xì)胞的制備與純化
            1.2.2 丁酸鈉(NaBu)對(duì)水牛成纖維細(xì)胞形態(tài)的檢測(cè)
            1.2.3 丁酸鈉(NaBu)處理水牛成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)的測(cè)定
            1.2.4 丁酸鈉(NaBu)對(duì)水牛成纖維細(xì)胞周期的測(cè)定
            1.2.5 丁酸鈉(NaBu)對(duì)水牛成纖維細(xì)胞凋亡的測(cè)定
    2 結(jié)果與分析
    3 討論
    4 小結(jié)
第三章 5-aza-dC和NaBu聯(lián)合處理對(duì)供體細(xì)胞生長(zhǎng)、周期、凋亡及克隆胚胎發(fā)育的影響
    1 材料與方法
        1.1 試驗(yàn)材料
            1.1.1 主要儀器
            1.1.2 試驗(yàn)試劑和藥品
            1.1.3 試驗(yàn)操作液
            1.1.4 顯微操作針的制備
        1.2 試驗(yàn)方案與方法
            1.2.1 試驗(yàn)方案
            1.2.2 試驗(yàn)方法
        1.3 試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 5-aza-dC和NaBu聯(lián)合處理對(duì)水牛成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
        2.2 5-aza-dC和NaBu聯(lián)合處理對(duì)水牛成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率的影響
        2.3 5-aza-dC和NaBu聯(lián)合處理對(duì)水牛成纖維細(xì)胞周期的影響
        2.4 5-aza-dC和NaBu聯(lián)合處理對(duì)水牛成纖維細(xì)胞凋亡的影響
        2.5 5-aza-dC和NaBu聯(lián)合處理供體細(xì)胞對(duì)水牛-黃牛異種核移植胚胎發(fā)育的影響
    3 討論
        3.1 5-aza-dC和NaBu聯(lián)合處理水牛成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡的影響
        3.2 異種與同種體細(xì)胞核移植胚胎發(fā)育
        3.3 NaBu對(duì)體細(xì)胞核移植胚胎發(fā)育的影響
        3.4 5-aza-dC和NaBu聯(lián)合處理供體細(xì)胞對(duì)核移植胚胎發(fā)育的影響
    4 小結(jié)
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附圖
致謝



本文編號(hào)：3763716