發(fā)布時間：2023-03-18 19:18

　　體細胞核移植技術對于體外胚胎的生產(chǎn)具有重要的意義,但是體細胞核移植成功率非常低,影響了該技術的實際應用。目前認為體細胞核移植效率低的主要原因是供體細胞的不完全重編程�？茖W家們已經(jīng)嘗試使用DNA甲基化酶抑制劑和組蛋白去乙�；敢种苿┨幚砗艘浦补w細胞或胚胎,從而提高表觀遺傳重編程的程度。本試驗用DNA甲基化酶抑制劑5-氮-2-脫氧胞苷(5-aza-dC)和組蛋白去乙�；敢种苿┒∷徕c(Sodium butyrate, NaBu)處理水牛成纖維細胞,檢測細胞形態(tài)、生長、周期和凋亡等,并移植到黃牛卵母細胞中,觀察胚胎發(fā)育情況,從而篩選兩種試劑處理供體細胞的最佳處理方式,得到如下結果與結論： 1.不同濃度的NaBu對水牛成纖維細胞形態(tài)、生長、細胞周期和凋亡的影響 用0、0.5、1.0、2.0、2.5和3.0mmol/L NaBu處理水牛成纖維細胞,檢測細胞形態(tài)、生長、周期和凋亡,確定處理細胞的最佳濃度。結果顯示：0.5和1.0mmol/L NaBu處理的細胞形態(tài)正常,2.0、2.5和3.0mmol/L NaBu處理的細胞變大變長,并出現(xiàn)大量死亡；隨著NaBu濃度的升高,對細胞生長抑制作用增強,...

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 文獻綜述
    1 哺乳動物體細胞核移植研究進展
        1.1 異種克隆研究進展
    2 影響核移植效率的因素
        2.1 供體細胞的選擇
        2.2 供體細胞的周期狀態(tài)
        2.3 供體細胞的細胞系
    3 體細胞核移植表觀遺傳修飾研究進展
        3.1 DNA甲基化
        3.2 組蛋白乙�；�
        3.3 X染色體失活
        3.4 基因組印記
        3.5 端粒和端粒酶
    4 DNA甲基化與體細胞核移植
        4.1 DNA甲基化酶抑制劑5-aza-dC
    5 組蛋白乙�；c體細胞核移植
    6 研究目的與意義
第二章 丁酸鈉(NaBu)對供體細胞形態(tài)、生長、周期和凋亡的影響
    1 材料和方法
        1.1 試驗材料
            1.1.1 主要儀器
            1.1.2 試劑
        1.2 試驗方法
            1.2.1 水牛、黃牛耳成纖維細胞的制備與純化
            1.2.2 丁酸鈉(NaBu)對水牛成纖維細胞形態(tài)的檢測
            1.2.3 丁酸鈉(NaBu)處理水牛成纖維細胞生長曲線的測定
            1.2.4 丁酸鈉(NaBu)對水牛成纖維細胞周期的測定
            1.2.5 丁酸鈉(NaBu)對水牛成纖維細胞凋亡的測定
    2 結果與分析
    3 討論
    4 小結
第三章 5-aza-dC和NaBu聯(lián)合處理對供體細胞生長、周期、凋亡及克隆胚胎發(fā)育的影響
    1 材料與方法
        1.1 試驗材料
            1.1.1 主要儀器
            1.1.2 試驗試劑和藥品
            1.1.3 試驗操作液
            1.1.4 顯微操作針的制備
        1.2 試驗方案與方法
            1.2.1 試驗方案
            1.2.2 試驗方法
        1.3 試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    2 結果與分析
        2.1 5-aza-dC和NaBu聯(lián)合處理對水牛成纖維細胞生長的影響
        2.2 5-aza-dC和NaBu聯(lián)合處理對水牛成纖維細胞生長抑制率的影響
        2.3 5-aza-dC和NaBu聯(lián)合處理對水牛成纖維細胞周期的影響
        2.4 5-aza-dC和NaBu聯(lián)合處理對水牛成纖維細胞凋亡的影響
        2.5 5-aza-dC和NaBu聯(lián)合處理供體細胞對水牛-黃牛異種核移植胚胎發(fā)育的影響
    3 討論
        3.1 5-aza-dC和NaBu聯(lián)合處理水牛成纖維細胞生長、細胞周期、細胞凋亡的影響
        3.2 異種與同種體細胞核移植胚胎發(fā)育
        3.3 NaBu對體細胞核移植胚胎發(fā)育的影響
        3.4 5-aza-dC和NaBu聯(lián)合處理供體細胞對核移植胚胎發(fā)育的影響
    4 小結
總結
參考文獻
附圖
致謝



本文編號：3763716