犏牛是雄性普通牛和雌性牦牛的種間F1代雜種,生產(chǎn)性能顯著優(yōu)于親本,對青藏高原惡劣氣候環(huán)境也具有杰出的適應(yīng)能力,但雄性犏牛因精子發(fā)生阻滯不育極大的限制了其在牦牛雜交育種中的有效利用。miRNA作為一類非編碼小RNA在轉(zhuǎn)錄后水平通過影響靶mRNA的穩(wěn)定性或者抑制蛋白翻譯過程從而調(diào)控基因的表達水平。為了解miRNA在犏牛精子發(fā)生阻滯中可能的調(diào)控作用,本研究通過illumina深度測序篩選鑒定牦牛及犏牛睪丸組織間差異表達miRNA;并初步分析了bta-miR-34c調(diào)控牦牛精原細胞分化的分子機制。結(jié)果如下:(1)通過牦牛與犏牛睪丸組織TUNEL-POD染色分析發(fā)現(xiàn),犏牛睪丸組織生精小管內(nèi)只有單層附著在生精小管基底膜的精原細胞以及少量精母細胞,無圓形或延伸的精子細胞,并且精原細胞最早開始發(fā)生凋亡,至精母細胞時期加重,從而導(dǎo)致后續(xù)精子發(fā)生中斷以致無精子生成;(2)通過牦牛與犏牛睪丸組織轉(zhuǎn)錄組miRNA高通量測序以及生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),61個miRNA在犏牛與牦牛睪丸組織之間差異表達顯著,其中miR-19b-3p、miR-592、miR-135a、miR-378和miR-184參與SSCs自我更新以...

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略詞表
第一章 文獻綜述
    1.1 犏牛雄性不育的研究現(xiàn)狀
    1.2 miRNA的研究概述
        1.2.1 miRNA的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 miRNA的來源
    1.3 miRNA在精子發(fā)生過程中的調(diào)控作用
        1.3.1 miRNA對原始生殖細胞的影響
        1.3.2 miRNA對精原細胞自我更新以及分化的影響
        1.3.3 miRNA對精母細胞減數(shù)分裂以及精子形成的影響
        1.3.4 miRNA相關(guān)蛋白對于精子發(fā)生的影響
    1.4 精原干細胞分離鑒定研究現(xiàn)狀
        1.4.1 精原干細胞的分離富集
        1.4.2 兩步酶消化法
        1.4.3 單位重力沉降
        1.4.4 不連續(xù)Percoll密度梯度離心
        1.4.5 免疫磁珠細胞分選
        1.4.6 流式細胞分選技術(shù)
    1.5 本研究的目的與意義
第二章 牦牛和犏牛睪丸組織中差異表達miRNA分析
    2.1 材料和方法
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 主要的儀器設(shè)備
        2.1.3 主要的試劑
        2.1.4 牦牛及犏牛睪丸組織石蠟切片
        2.1.5 牦牛及犏牛睪丸組織TUNEL-POD檢測
        2.1.6 RNA提取
        2.1.7 miRNA克隆測序以及數(shù)據(jù)分析
        2.1.8 差異表達miRNA分析
        2.1.9 差異表達miRNA靶基因預(yù)測以及GO條目KEGG通路富集分析
        2.1.10 差異表達miRNA及其靶基因RT-qPCR驗證
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 牦牛及犏牛睪丸組織細胞凋亡分析
        2.2.2 小RNA分類
        2.2.3 差異表達miRNA鑒定
        2.2.4 靶基因預(yù)測以及通路富集分析
        2.2.5 差異表達miRNA及其靶基因RT-qPCR驗證
    2.3 討論
        2.3.1 差異表達miRNA在精原細胞自我更新與分化過程中的調(diào)控作用
        2.3.2 差異表達miRNA在精母細胞減數(shù)分裂過程中的調(diào)控作用
    2.4 小結(jié)
第三章 bta-miR-34c對牦牛精原細胞分化的影響
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實驗動物
        3.1.2 主要的儀器設(shè)備
        3.1.3 主要的試劑
        3.1.4 牦牛生精細胞單細胞懸液制備
        3.1.5 牦牛生精細胞STA-PUT自然沉降分離
        3.1.6 牦牛生精細胞總RNA提取以及RT-PCR表型鑒定
        3.1.7 牦牛精原細胞bta-miR-34c轉(zhuǎn)染
        3.1.8 牦牛精原細胞轉(zhuǎn)染bta-miR-34c后相關(guān)基因RT-qPCR檢測
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 牦牛生精細胞的分離鑒定
        3.2.2 牦牛精原細胞bta-miR-34c過表達分析
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
結(jié)論
致謝
參考文獻
附錄
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果



本文編號：3763315