犏牛是雄性普通牛和雌性牦牛的種間F1代雜種,生產(chǎn)性能顯著優(yōu)于親本,對(duì)青藏高原惡劣氣候環(huán)境也具有杰出的適應(yīng)能力,但雄性犏牛因精子發(fā)生阻滯不育極大的限制了其在牦牛雜交育種中的有效利用。miRNA作為一類非編碼小RNA在轉(zhuǎn)錄后水平通過影響靶mRNA的穩(wěn)定性或者抑制蛋白翻譯過程從而調(diào)控基因的表達(dá)水平。為了解miRNA在犏牛精子發(fā)生阻滯中可能的調(diào)控作用,本研究通過illumina深度測(cè)序篩選鑒定牦牛及犏牛睪丸組織間差異表達(dá)miRNA;并初步分析了bta-miR-34c調(diào)控牦牛精原細(xì)胞分化的分子機(jī)制。結(jié)果如下:(1)通過牦牛與犏牛睪丸組織TUNEL-POD染色分析發(fā)現(xiàn),犏牛睪丸組織生精小管內(nèi)只有單層附著在生精小管基底膜的精原細(xì)胞以及少量精母細(xì)胞,無(wú)圓形或延伸的精子細(xì)胞,并且精原細(xì)胞最早開始發(fā)生凋亡,至精母細(xì)胞時(shí)期加重,從而導(dǎo)致后續(xù)精子發(fā)生中斷以致無(wú)精子生成;(2)通過牦牛與犏牛睪丸組織轉(zhuǎn)錄組miRNA高通量測(cè)序以及生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),61個(gè)miRNA在犏牛與牦牛睪丸組織之間差異表達(dá)顯著,其中miR-19b-3p、miR-592、miR-135a、miR-378和miR-184參與SSCs自我更新以...

【文章頁(yè)數(shù)】：88 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 犏牛雄性不育的研究現(xiàn)狀
    1.2 miRNA的研究概述
        1.2.1 miRNA的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 miRNA的來(lái)源
    1.3 miRNA在精子發(fā)生過程中的調(diào)控作用
        1.3.1 miRNA對(duì)原始生殖細(xì)胞的影響
        1.3.2 miRNA對(duì)精原細(xì)胞自我更新以及分化的影響
        1.3.3 miRNA對(duì)精母細(xì)胞減數(shù)分裂以及精子形成的影響
        1.3.4 miRNA相關(guān)蛋白對(duì)于精子發(fā)生的影響
    1.4 精原干細(xì)胞分離鑒定研究現(xiàn)狀
        1.4.1 精原干細(xì)胞的分離富集
        1.4.2 兩步酶消化法
        1.4.3 單位重力沉降
        1.4.4 不連續(xù)Percoll密度梯度離心
        1.4.5 免疫磁珠細(xì)胞分選
        1.4.6 流式細(xì)胞分選技術(shù)
    1.5 本研究的目的與意義
第二章 牦牛和犏牛睪丸組織中差異表達(dá)miRNA分析
    2.1 材料和方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 主要的儀器設(shè)備
        2.1.3 主要的試劑
        2.1.4 牦牛及犏牛睪丸組織石蠟切片
        2.1.5 牦牛及犏牛睪丸組織TUNEL-POD檢測(cè)
        2.1.6 RNA提取
        2.1.7 miRNA克隆測(cè)序以及數(shù)據(jù)分析
        2.1.8 差異表達(dá)miRNA分析
        2.1.9 差異表達(dá)miRNA靶基因預(yù)測(cè)以及GO條目KEGG通路富集分析
        2.1.10 差異表達(dá)miRNA及其靶基因RT-qPCR驗(yàn)證
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 牦牛及犏牛睪丸組織細(xì)胞凋亡分析
        2.2.2 小RNA分類
        2.2.3 差異表達(dá)miRNA鑒定
        2.2.4 靶基因預(yù)測(cè)以及通路富集分析
        2.2.5 差異表達(dá)miRNA及其靶基因RT-qPCR驗(yàn)證
    2.3 討論
        2.3.1 差異表達(dá)miRNA在精原細(xì)胞自我更新與分化過程中的調(diào)控作用
        2.3.2 差異表達(dá)miRNA在精母細(xì)胞減數(shù)分裂過程中的調(diào)控作用
    2.4 小結(jié)
第三章 bta-miR-34c對(duì)牦牛精原細(xì)胞分化的影響
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 主要的儀器設(shè)備
        3.1.3 主要的試劑
        3.1.4 牦牛生精細(xì)胞單細(xì)胞懸液制備
        3.1.5 牦牛生精細(xì)胞STA-PUT自然沉降分離
        3.1.6 牦牛生精細(xì)胞總RNA提取以及RT-PCR表型鑒定
        3.1.7 牦牛精原細(xì)胞bta-miR-34c轉(zhuǎn)染
        3.1.8 牦牛精原細(xì)胞轉(zhuǎn)染bta-miR-34c后相關(guān)基因RT-qPCR檢測(cè)
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 牦牛生精細(xì)胞的分離鑒定
        3.2.2 牦牛精原細(xì)胞bta-miR-34c過表達(dá)分析
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果



本文編號(hào)：3763315