自從1997年世界首例體細胞克隆綿羊多莉誕生以來,體細胞核移植技術在多個物種中得以成功實踐。轉基因技術與體細胞克隆技術相結合是目前制備轉基因大動物的主要手段。但由于克隆技術體系并不完善,至今仍未克服克隆效率低的問題。而轉基因技術的介入,使得轉基因克隆技術又增加了更多的變數。在轉基因動物制備過程中出現了很多問題,如胚胎移植后妊娠率低、流產率高、胎兒發(fā)育異常、出生死亡率高等。而外源基因整合效率低,以及外源基因的沉默或丟失等現象更加制約了這項技術的實際應用。在總結了大量的前期工作的基礎上,我們對以牛為主的體細胞克隆體系進行了系統(tǒng)的改進與調整。包括卵母細胞的成熟、去核時間段的選擇、重構胚激活處理方式、胚胎培養(yǎng)、受體母牛的發(fā)情狀態(tài)與胚胎發(fā)育時期的匹配等都進行了改進,形成了一套較為完整的牛體細胞克隆技術體系。利用改進的技術體系開展了大規(guī)模的轉基因克隆牛生產。共完成對33043枚卵母細胞的去核與注核操作,得到融合胚胎26548枚,生產出各種轉基因克隆囊胚7519枚,規(guī)�；寺∧遗咝蕿�28.3%。共移植受體牛1523頭,妊娠414頭,妊娠率為27.2%。通過將體細胞克隆技術的系統(tǒng)改進與大規(guī)模的轉基因...

【文章頁數】：99 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
引言
    參考文獻
第一部分 研究論文
    第一章 牛體細胞核移植技術的改進與優(yōu)化
        摘要
        前言
        1 材料和方法
        2 結果
        3 討論
        參考文獻
    第二章 克隆胚胎的選擇與受體母牛發(fā)情狀態(tài)的匹配
        摘要
        前言
        1 材料和方法
        2 結果
        3 討論
        參考文獻
    第三章 多不飽和脂肪酸去飽和酶基因轉基因克隆牛的制備
        摘要
        前言
        1 材料和方法
        2 結果
        3 討論
        參考文獻
    結論
第二部分 文獻綜述
    第一章 體細胞核移植研究進展
        1 體細胞核移植的發(fā)展歷程
        2 牛體細胞核移植的研究進展
        3 體細胞核移植技術在應用中存在的問題
        4 體細胞核移植技術的應用前景
    第二章 轉基因動物研究概論
        1 轉基因動物研究進展
        2 轉基因動物的制作方法
        3 轉基因動物的后期檢測
    參考文獻
致謝
攻讀學位期間發(fā)表的論文



本文編號：3762313