細(xì)胞核是具有高度組織性的結(jié)構(gòu),它有序清晰的排列成許多膜缺失的核小體,這種結(jié)構(gòu)區(qū)劃方式對(duì)于基本分子復(fù)合物來說被認(rèn)為是最重要,最有效的形式。而我們的研究則主要集中在PNC (The Perinucleolar Compartment)這個(gè)核小體上。 PNC是一種特異性的細(xì)胞亞核結(jié)構(gòu),它與腫瘤惡性轉(zhuǎn)化密切相關(guān)。細(xì)胞的高PNC含有率(含一個(gè)或多個(gè)PNC的細(xì)胞數(shù)量)與惡性腫瘤轉(zhuǎn)移能力呈正相關(guān),并在癌癥模型中指示為預(yù)后不良。為了確認(rèn)PNC與惡性腫瘤之間的功能聯(lián)系,我們研究了與PNC相聯(lián)接的分子復(fù)合物。研究顯示PNC中含有大量由RNA聚合酶Ⅲ轉(zhuǎn)錄的RNA(如MRP,核糖核酸酶P)和RNA聚合酶Ⅱ結(jié)合的蛋白質(zhì)(如PTB, CUGBP)。 為了進(jìn)一步探索PNC中RNA與蛋白質(zhì)之間的相互作用,我們運(yùn)用pull down和免疫沉淀實(shí)驗(yàn)(IP)的方法,觀察到了MRP RNA、PTB和CUGBP之間存在著相互影響的沉淀聯(lián)系。使用高分辨率熒光顯微系統(tǒng)(OMX)對(duì)細(xì)胞核中各個(gè)組分分布進(jìn)行分析表明,MPR RNA與PTB和CUGBP的分布形式呈一種網(wǎng)絡(luò)狀系統(tǒng)。先前的研究已確認(rèn)MRP RNA與hTERT蛋白或MRP R...

【文章頁數(shù)】：110 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
目錄
1. 文獻(xiàn)綜述
    1.1 核形態(tài)與癌癥
    1.2 PNC及其在惡性腫瘤中的作用
    1.3 PNC結(jié)構(gòu)與DNA聯(lián)系
    1.4 PNC結(jié)構(gòu)與RNA的轉(zhuǎn)錄
    1.5 PNC結(jié)構(gòu)的分子組分
    1.6 MRP RNA的RNP功能
    1.7 PTB蛋白與CUGBP蛋白的細(xì)胞功能
2. PNC結(jié)構(gòu)中多種新發(fā)現(xiàn)的RNA與蛋白質(zhì)間的相互作用
    2.1 材料與方法
        2.1.1 細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染
        2.1.2 質(zhì)粒
        2.1.3 Pull down與免疫沉淀反應(yīng)
        2.1.4 原位雜交和免疫標(biāo)記
        2.1.5 RNA提取和cDNA合成
        2.1.6 蛋白免疫印跡
        2.1.7 光脫色熒光恢復(fù)技術(shù)(FRAP)
        2.1.8 BrU結(jié)合試驗(yàn)
        2.1.9 顯微鏡檢測及其圖像分析
        2.1.10 甘油梯度沉積法
        2.1.11 PNC結(jié)構(gòu)含有率的定量分析
        2.1.12 免疫組化
        2.1.13 生物素標(biāo)記RNA pull down
        2.1.14 質(zhì)譜分析法
        2.1.15 銀凝膠
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 RNA聚合酶Ⅱ的轉(zhuǎn)錄抑制并不影響CUGBP或PTB蛋白在PNC結(jié)構(gòu)中的富集
        2.2.2 細(xì)胞內(nèi)MRP RNA存在于一個(gè)包含了CUGBP和PTB蛋白的復(fù)合物中
        2.2.3 OMX顯微系統(tǒng)觀察PNC結(jié)構(gòu)中CUGBP、PTB蛋白與MRP RNA的共同區(qū)域分布情況
        2.2.4 檢測顯示蛋白組分已明確的MRP RNA復(fù)合物不富集于PNC結(jié)構(gòu)中
        2.2.5 PNC結(jié)構(gòu)各組分的互相補(bǔ)充
        2.2.6 MRP RNA、CUGBP蛋白和PTB蛋白的沉降特性
        2.2.7 PNC中的CUGBP與PTB與其核質(zhì)中的CUGBP與PTB不同表現(xiàn)比較
        2.2.8 PNC相關(guān)復(fù)合物與新合成RNA的相互交錯(cuò)關(guān)聯(lián)
        2.2.9 CUGBP-PTB-MRP RNA復(fù)合物中其他蛋白質(zhì)的鑒定
        2.2.10 惡性腫瘤細(xì)胞中MRP RNA的表達(dá)
        2.2.11 PNC結(jié)構(gòu)在甲狀腺癌中的預(yù)后價(jià)值調(diào)查
        2.2.12 在PNC含有率較高的細(xì)胞系中IGF2BP2表達(dá)增加情況的檢測
    2.3 討論
    2.4 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文和論著信息



本文編號(hào)：3761745