豬圓環(huán)病毒病是由豬圓環(huán)病毒2型(Porcine Cirovirus Type 2,PCV2)感染所致,臨床癥狀表現(xiàn)為斷奶仔豬的多系統(tǒng)衰竭綜合征、皮炎腎病綜合征及母豬的繁殖障礙等,是嚴重危害養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的重要疾病之一,給世界各國養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)造成了巨大經(jīng)濟損失。該病快速診斷與檢測技術(shù)的研究一直是各國學(xué)者研究的熱點課題。雖然目前已經(jīng)建立了聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、直接免疫熒光、病毒分離鑒定等診斷與檢測技術(shù),但缺少可快速讀取檢測數(shù)值的技術(shù)方法。因此,開展PCV2抗原抗體快速讀取檢測數(shù)值技術(shù)的研究對于該病的成功防控十分必要。本論文基于原核表達純化的Cap蛋白,建立了PCV2抗體熒光微球免疫層析快速檢測技術(shù),基于可配對的PCV2單克隆抗體,建立了PCV2抗原熒光微球免疫層析快速檢測技術(shù),豐富了PCV2抗原抗體的快速檢測技術(shù)。本研究成功擴增出702 bp的Cap基因,構(gòu)建了pET30a(+)-Cap的原核表達載體,表達了分子量約為36 Ku的含有His標簽Cap融合蛋白;通過條件優(yōu)化,確定了最佳蛋白誘導(dǎo)表達條件,轉(zhuǎn)速180 rpm,IPTG誘導(dǎo)終濃度為0.5 mM,誘導(dǎo)...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 豬圓環(huán)病毒病的概述
        1.1.1 病原
        1.1.2 豬圓環(huán)病毒病的流行病學(xué)
        1.1.3 發(fā)病機理
        1.1.4 癥狀
        1.1.5 豬圓環(huán)病毒病的診斷方法
    1.2 豬圓環(huán)病毒cap蛋白研究進展
        1.2.1 圓環(huán)cap蛋白的簡介
        1.2.2 圓環(huán)cap蛋白的檢測方法、疫苗研究
    1.3 熒光微球為標記物的免疫層析試紙條
        1.3.1 免疫層析試紙條
        1.3.2 熒光微球
        1.3.3 熒光微球在免疫層析技術(shù)中的應(yīng)用
        1.3.4 膠體金免疫層析方法比較
        1.3.5 檢測原理及結(jié)果判斷
    1.4 研究的意義及目的
2 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 重組菌種
        2.1.2 熒光微球免疫層析材料等試驗材料
        2.1.3 儀器
        2.1.4 試劑制備
    2.2 方法
        2.2.1 豬圓環(huán)Cap基因克隆及原核表達方法
        2.2.2 豬圓環(huán)病毒2 型抗體熒光微球免疫層析快速檢測方法的建立與應(yīng)用
        2.2.3 豬圓環(huán)病毒2 型抗原熒光微球免疫層析快速檢測方法的建立與應(yīng)用
3 結(jié)果與分析
    3.1 Cap基因克隆及重組表達質(zhì)粒構(gòu)建
    3.2 Cap重組蛋白的表達及鑒定
    3.3 蛋白表達條件的優(yōu)化
    3.4 PCV2 抗體熒光微球免疫層析快速檢測方法的建立與應(yīng)用
    3.5 PCV2 抗原熒光微球免疫層析快速檢測方法的建立與應(yīng)用
4 討論
    4.1 豬圓環(huán)cap蛋白表達
    4.2 PCV2 抗體熒光微球免疫層析快速檢測試紙條的建立與應(yīng)用
    4.3 PCV2 抗原熒光微球免疫層析快速檢測試紙條的建立與應(yīng)用
5 結(jié)論
參考文獻
致謝



本文編號：3759822