副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis, HPS)是引起豬的多發(fā)性漿膜炎、腦膜炎和關(guān)節(jié)炎的一種革蘭氏陰性桿菌。副豬嗜血桿菌病又稱為Glasser’s病,給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。副豬嗜血桿菌具有15個血清型和不可分型菌株,有很強(qiáng)的宿主特異性,2周齡到4月齡的豬易感,尤其對早期斷奶仔豬造成了嚴(yán)重的危害。目前主要通過滅活苗和抗生素來預(yù)防和控制副豬嗜血桿菌病,但單價疫苗免疫不能產(chǎn)生交叉保護(hù)作用,所以通過抗生素進(jìn)行預(yù)防和治療該病,仍是一種常見的方法。而抗生素的不合理使用導(dǎo)致越來越多的細(xì)菌對抗生素產(chǎn)生了耐藥性,嚴(yán)重影響了抗生素的殺菌作用。近年來,許多國家都報道了副豬嗜血桿菌存在耐藥現(xiàn)象,因此,有必要對副豬嗜血桿菌進(jìn)行耐藥性調(diào)查和耐藥機(jī)制研究。本研究首先對臨床菌株進(jìn)行了耐藥流行病學(xué)調(diào)查和內(nèi)源性質(zhì)粒的分離鑒定,然后分析青霉素結(jié)合蛋白的突變位點(diǎn)與氨芐青霉素耐藥菌株和攜帶內(nèi)源性質(zhì)粒菌株之間的關(guān)系。同時,通過基因表達(dá)譜芯片研究副豬嗜血桿菌SH0165在亞抑制濃度和抑制濃度替米考星作用下的轉(zhuǎn)錄組學(xué)變化,揭示了亞抑制濃度和抑制濃度(0.25μg/mL和8μg/mL)替米考星的作用機(jī)制。...

【文章頁數(shù)】：147 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 細(xì)菌耐藥性研究進(jìn)展
        1.1.1 耐藥性的產(chǎn)生機(jī)制
        1.1.2 耐藥基因的來源
        1.1.3 非遺傳性耐藥機(jī)理
        1.1.4 多重耐藥性機(jī)理
        1.1.5 耐藥性的進(jìn)化過程
        1.1.6 耐藥性的預(yù)測方法
        1.1.7 耐藥性消除的研究進(jìn)展
    1.2 副豬嗜血桿菌病的研究
        1.2.1 病原學(xué)
        1.2.2 流行病學(xué)
        1.2.3 臨床癥狀和病理變化
        1.2.4 副豬嗜血桿菌的毒力相關(guān)基因
        1.2.5 副豬嗜血桿菌的檢測方法
        1.2.6 副豬嗜血桿菌的防治措施
        1.2.7 副豬嗜血桿菌耐藥性研究
    1.3 青霉素結(jié)合蛋白的研究進(jìn)展
        1.3.1 細(xì)菌中青霉素結(jié)合蛋白的概況
        1.3.2 青霉素結(jié)合蛋白在肽聚糖合成中的作用
        1.3.3 β-內(nèi)酰胺類抗生素與PBPs的相互作用
    1.4 基因表達(dá)譜芯片在病原微生物研究中的應(yīng)用
    1.5 本研究的目的和意義
第二章 副豬嗜血桿菌的耐藥流行病學(xué)調(diào)查和內(nèi)源性質(zhì)粒的分離鑒定
    2.1 前言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 菌株
        2.2.2 載體
        2.2.3 引物序列
        2.2.4 酶及主要試劑
        2.2.5 主要培養(yǎng)基和溶液的配制
        2.2.6 主要實(shí)驗(yàn)器材
    2.3 試驗(yàn)方法
        2.3.1 副豬嗜血桿菌的分離和鑒定
        2.3.2 藥物敏感性檢測
        2.3.3 耐藥基因的PCR檢測
        2.3.4 質(zhì)粒小提
        2.3.5 質(zhì)粒大提
        2.3.6 質(zhì)粒的測序策略
        2.3.7 DNA操作技術(shù)
        2.3.8 采用CaCl₂法制備感受態(tài)細(xì)胞
        2.3.9 熱激轉(zhuǎn)化法
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 耐藥表型調(diào)查結(jié)果
        2.4.2 耐藥基因檢測結(jié)果
        2.4.3 內(nèi)源性質(zhì)粒的分離鑒定
        2.4.4 耐藥質(zhì)粒的同源性比較
    2.5 討論
        2.5.1 副豬嗜血桿菌的耐藥流行病學(xué)調(diào)查
        2.5.2 副豬嗜血桿菌內(nèi)源性質(zhì)粒的分離鑒定
        2.5.3 耐藥質(zhì)粒與細(xì)菌耐藥性的關(guān)系
第三章 分析副豬嗜血桿菌青霉素結(jié)合蛋白的突變位點(diǎn)
    3.1 前言
    3.2 試驗(yàn)材料
        3.2.1 菌株
        3.2.2 引物序列
        3.2.3 主要試劑和抗生素
        3.2.4 主要培養(yǎng)基和溶液的配制
        3.2.5 主要實(shí)驗(yàn)器材
    3.3 試驗(yàn)方法
        3.3.1 副豬嗜血桿菌的分離和鑒定
        3.3.2 副豬嗜血桿菌的ERIC-PCR方法
        3.3.3 質(zhì)粒小提
        3.3.4 β-內(nèi)酰胺類抗生素的敏感性檢測
        3.3.5 副豬嗜血桿菌PBPs基因的擴(kuò)增
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 58株HPS的基本信息
        3.4.2 β-內(nèi)酰胺類抗生素的敏感性結(jié)果
        3.4.3 58株HPS的進(jìn)化關(guān)系
        3.4.4 HPS PBPs基因的分類
        3.4.5 分析HPS PBPs的突變位點(diǎn)
        3.4.6 PBPs基因的登錄號
    3.5 討論
        3.5.1 副豬嗜血桿菌中PBPs的特點(diǎn)
        3.5.2 HPS中β-內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥情況
        3.5.3 HPS PBPs突變位點(diǎn)對β-內(nèi)酰胺類抗生素的影響
        3.5.4 HPS PBPs突變位點(diǎn)對內(nèi)源性質(zhì)粒的影響
第四章 替米考星誘導(dǎo)副豬嗜血桿菌SH0165的轉(zhuǎn)錄譜
    4.1 前言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 菌株與藥物
        4.4.2 化學(xué)試劑
        4.2.3 溶液配方與培養(yǎng)基
        4.2.4 主要儀器和設(shè)備
        4.2.5 試驗(yàn)方法
        4.2.6 Real-time PCR檢測
        4.2.7 統(tǒng)計學(xué)分析
    4.3 結(jié)果和分析
        4.3.1 替米考星的抑菌活性試驗(yàn)
        4.3.2 mRNA的提取及純度檢查
        4.3.3 差異表達(dá)基因的聚類分析
        4.3.4 替米考星處理HPS SH0165轉(zhuǎn)錄譜的整體變化情況
        4.3.5 RT-PCR驗(yàn)證芯片數(shù)據(jù)
        4.3.6 差異表達(dá)基因的功能分析
    4.4 討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄1：內(nèi)源性質(zhì)粒的核苷酸序列
    附錄2：本研究論文中的附表
致謝
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的文章
個人簡歷



本文編號：3753298