mTOR (the mammalian target of rapamycin)是一種Ser/Thr蛋白激酶,其存在于哺乳動物細胞中,并可以通過匯聚和整合細胞內外的信號(生長因子、營養(yǎng)、能量等)進而調控細胞的生長增殖。mTOR信號通路可以影響胚胎干細胞以及早期胚胎的發(fā)育,并且與代謝紊亂以及腫瘤等疾病有關,胰島素可起到正向調控作用。本課題選擇鵝肝細胞為樣本,在正常鵝原代肝細胞和mTOR信號通路被雷帕霉素(rapamycin)抑制的肝細胞中加入不同濃度的胰島素(0、50、100、150nmol/L)處理,檢測與細胞生長增殖相關的指標,探討胰島素對mTOR信號通路的調控機理。主要研究結果如下：1 用胰島素處理時,鵝肝細胞的DNA合成速率和細胞活性均隨著胰島素濃度的升高表現(xiàn)出上升趨勢,而且150nmol/L胰島素組的Brdu陽性細胞的數(shù)量比對照組增加了60%。同時,三種D型細胞周期蛋白(Cyclin D1, Cyclin D2, Cyclin D3)的mRNA表達量都隨著胰島素濃度的增加而逐漸升高(P<0.05),而細胞周期負調控因子P21和P27的mRNA表達量均受到抑制。與對照組相比...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要符號說明
前言
1. 文獻綜述
    1.1 mTOR信號通路的功能
        1.1.1 mTOR信號通路與凋亡
        1.1.2 mTOR信號通路與腫瘤
        1.1.3 mTOR信號通路與細胞生長增殖
    1.2 D型細胞周期蛋白與細胞周期
        1.2.1 Cylcin D的功能
        1.2.2 D型細胞周期蛋白與腫瘤
        1.2.3 CIP/KIP家族蛋白
    1.3 胰島素通過mTOR信號通路對細胞增殖的調控研究進展
        1.3.1 胰島素對細胞增殖的調控研究
        1.3.2 胰島素通過mTOR信號通路對細胞增殖的調控研究
    1.4 本實驗目的意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要試劑盒
        2.1.4 主要試劑配制
    2.2 試驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 胰島素培養(yǎng)肝細胞
        2.2.3 蛋白活性測定
        2.2.4 MTT比色法測細胞活性
        2.2.5 基因表達檢測
        2.2.6 Brdu-ELISA法檢測DNA含量
        2.2.7 Brdu細胞免疫染色檢測細胞增殖率
        2.2.8 Western Blot檢測蛋白表達
3 數(shù)據(jù)處理
4 結果與分析
    4.1 胰島素對鵝肝細胞的影響
    4.2 胰島素對mTOR信號通路相關基因及蛋白濃度的影響
    4.3 雷帕霉素對鵝肝細胞增殖的影響
    4.4 雷帕霉素對mTOR信號通路相關基因及蛋白濃度的影響
    4.5 胰島素和雷帕霉素共同對鵝肝細胞增殖的影響
    4.6. 胰島素和雷帕霉素共同對mTOR信號通路相關基因及蛋白濃度的影響
5 討論
    5.1 胰島素在鵝肝細胞生長增殖中的調控作用
    5.2 雷帕霉素通過mTOR信號通路調控鵝肝細胞的生長增殖
    5.3 胰島素通過mTOR信號通路調控鵝肝細胞增殖
6 結論
參考文獻
致謝



本文編號：3751918