發(fā)布時(shí)間：2023-03-01 17:19

　　mTOR (the mammalian target of rapamycin)是一種Ser/Thr蛋白激酶,其存在于哺乳動(dòng)物細(xì)胞中,并可以通過匯聚和整合細(xì)胞內(nèi)外的信號(hào)(生長(zhǎng)因子、營(yíng)養(yǎng)、能量等)進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖。mTOR信號(hào)通路可以影響胚胎干細(xì)胞以及早期胚胎的發(fā)育,并且與代謝紊亂以及腫瘤等疾病有關(guān),胰島素可起到正向調(diào)控作用。本課題選擇鵝肝細(xì)胞為樣本,在正常鵝原代肝細(xì)胞和mTOR信號(hào)通路被雷帕霉素(rapamycin)抑制的肝細(xì)胞中加入不同濃度的胰島素(0、50、100、150nmol/L)處理,檢測(cè)與細(xì)胞生長(zhǎng)增殖相關(guān)的指標(biāo),探討胰島素對(duì)mTOR信號(hào)通路的調(diào)控機(jī)理。主要研究結(jié)果如下：1 用胰島素處理時(shí),鵝肝細(xì)胞的DNA合成速率和細(xì)胞活性均隨著胰島素濃度的升高表現(xiàn)出上升趨勢(shì),而且150nmol/L胰島素組的Brdu陽性細(xì)胞的數(shù)量比對(duì)照組增加了60%。同時(shí),三種D型細(xì)胞周期蛋白(Cyclin D1, Cyclin D2, Cyclin D3)的mRNA表達(dá)量都隨著胰島素濃度的增加而逐漸升高(P<0.05),而細(xì)胞周期負(fù)調(diào)控因子P21和P27的mRNA表達(dá)量均受到抑制。與對(duì)照組相比...

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要符號(hào)說明
前言
1. 文獻(xiàn)綜述
    1.1 mTOR信號(hào)通路的功能
        1.1.1 mTOR信號(hào)通路與凋亡
        1.1.2 mTOR信號(hào)通路與腫瘤
        1.1.3 mTOR信號(hào)通路與細(xì)胞生長(zhǎng)增殖
    1.2 D型細(xì)胞周期蛋白與細(xì)胞周期
        1.2.1 Cylcin D的功能
        1.2.2 D型細(xì)胞周期蛋白與腫瘤
        1.2.3 CIP/KIP家族蛋白
    1.3 胰島素通過mTOR信號(hào)通路對(duì)細(xì)胞增殖的調(diào)控研究進(jìn)展
        1.3.1 胰島素對(duì)細(xì)胞增殖的調(diào)控研究
        1.3.2 胰島素通過mTOR信號(hào)通路對(duì)細(xì)胞增殖的調(diào)控研究
    1.4 本實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊饬x
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要試劑盒
        2.1.4 主要試劑配制
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 胰島素培養(yǎng)肝細(xì)胞
        2.2.3 蛋白活性測(cè)定
        2.2.4 MTT比色法測(cè)細(xì)胞活性
        2.2.5 基因表達(dá)檢測(cè)
        2.2.6 Brdu-ELISA法檢測(cè)DNA含量
        2.2.7 Brdu細(xì)胞免疫染色檢測(cè)細(xì)胞增殖率
        2.2.8 Western Blot檢測(cè)蛋白表達(dá)
3 數(shù)據(jù)處理
4 結(jié)果與分析
    4.1 胰島素對(duì)鵝肝細(xì)胞的影響
    4.2 胰島素對(duì)mTOR信號(hào)通路相關(guān)基因及蛋白濃度的影響
    4.3 雷帕霉素對(duì)鵝肝細(xì)胞增殖的影響
    4.4 雷帕霉素對(duì)mTOR信號(hào)通路相關(guān)基因及蛋白濃度的影響
    4.5 胰島素和雷帕霉素共同對(duì)鵝肝細(xì)胞增殖的影響
    4.6. 胰島素和雷帕霉素共同對(duì)mTOR信號(hào)通路相關(guān)基因及蛋白濃度的影響
5 討論
    5.1 胰島素在鵝肝細(xì)胞生長(zhǎng)增殖中的調(diào)控作用
    5.2 雷帕霉素通過mTOR信號(hào)通路調(diào)控鵝肝細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖
    5.3 胰島素通過mTOR信號(hào)通路調(diào)控鵝肝細(xì)胞增殖
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3751918