為揭示豬鏈球菌抗氧化應(yīng)激的機(jī)制,采用比較蛋白組學(xué)方法,鑒定豬鏈球菌抗氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白。提取豬鏈球菌全菌蛋白,以THB培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)菌作為對(duì)照,經(jīng)H₂O₂處理后,液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜共鑒定出54個(gè)差異表達(dá)蛋白,其中28個(gè)蛋白在H₂O₂處理組中上調(diào)表達(dá),26個(gè)蛋白下調(diào)表達(dá)。這些差異表達(dá)的蛋白主要參與代謝、生物合成、抗應(yīng)激等過程。深入分析,發(fā)現(xiàn)7個(gè)新的蛋白可能參與豬鏈球菌抗氧化應(yīng)激;從中選擇在H₂O₂處理組顯著上調(diào)表達(dá)的2個(gè)蛋白YbaB/EbfC家族核苷相關(guān)蛋白(YED)和2-氨基-4-羥基-6-羥甲基二氫蝶啶二磷酸激酶(AHH)進(jìn)行驗(yàn)證。分別構(gòu)建二者缺失株ΔYED和ΔAHH;生長(zhǎng)曲線分析表明,2個(gè)缺失株在THB培養(yǎng)基中生長(zhǎng)與野生株相似;氧化應(yīng)激試驗(yàn)表明,經(jīng)H₂O₂作用后,野生株存活率為97.12%,而ΔYED與ΔAHH則顯著降低,分別為72.69%(P<0.05)和79.49%(P<0.05);小鼠巨噬細(xì)胞...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要試劑
    1.2 菌株、細(xì)胞和培養(yǎng)條件
    1.3 全菌蛋白提取及LC-MS/MS分析
    1.4 YED、AHH缺失株的構(gòu)建
        1.4.1 Spc耐受正向篩選
        1.4.2 sacB反向篩選
    1.5 P1/7、ΔYED和ΔAHH菌株生長(zhǎng)曲線的測(cè)定
    1.6 抗氧化應(yīng)激試驗(yàn)
    1.7 RAW264.7吞噬與存活試驗(yàn)
    1.8 統(tǒng)計(jì)分析
2 結(jié)果
    2.1 LC-MS/MS比較蛋白組學(xué)分析
    2.2 YED、AHH對(duì)豬鏈球菌生長(zhǎng)特性的影響
    2.3 YED、AHH對(duì)豬鏈球菌抗氧化應(yīng)激能力的影響
    2.4 RAW264.7吞噬與存活試驗(yàn)
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