旨在分離感染PCV2的PK-15細(xì)胞分泌的外泌體,探討其在PCV2感染淋巴細(xì)胞中的作用。提取PCV2感染PK-15細(xì)胞上清液中的外泌體,利用透射電鏡觀察外泌體形態(tài)、納米顆粒跟蹤分析測定外泌體粒徑、Western blot檢測外泌體標(biāo)記蛋白分子(CD81、TSG101);PKH67標(biāo)記外泌體后檢測細(xì)胞對外泌體的攝取;提取PCV2-外泌體基因組,檢測PCV2 Rep和Cap基因;利用間接免疫熒光試驗(yàn)檢測PCV2-外泌體感染PK-15細(xì)胞后PCV2病毒定位;通過絕對定量PCR檢測PCV2-外泌體對淋巴細(xì)胞的感染率;利用CCK-8法檢測淋巴細(xì)胞增殖;利用Annexin V-FITC/PI檢測淋巴細(xì)胞凋亡率。透射電鏡和外泌體粒徑分析結(jié)果顯示,PK-15細(xì)胞分泌的外泌體為雙層膜的囊泡,直徑30～200 nm;Western blot結(jié)果顯示PK-15細(xì)胞分泌的外泌體存在特異性標(biāo)記蛋白CD81和TSG101;外泌體攝取試驗(yàn)結(jié)果顯示PCV2-外泌體能夠被細(xì)胞攝取;PCR結(jié)果表明PCV2-外泌體基因組中含有PCV2 Rep和Cap基因;間接免疫熒光結(jié)果顯示,與PCV2直接感染相比,PCV2-外泌體感染的...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細(xì)胞和病毒及主要試劑材料
    1.2 外泌體的提取
    1.3 透射電鏡觀察
    1.4 Western blot
    1.5 PCR
    1.6 外泌體攝取試驗(yàn)
    1.7 間接免疫熒光
    1.8 豬脾淋巴細(xì)胞分離
    1.9 絕對定量PCR
    1.10 豬脾淋巴細(xì)胞增殖活性試驗(yàn)
    1.11 豬脾淋巴細(xì)胞凋亡試驗(yàn)
    1.12 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
2 結(jié) 果
    2.1 PK-15細(xì)胞分泌外泌體特征
    2.2 外泌體攝取試驗(yàn)
    2.3 外泌體中PCV2基因組DNA檢測
    2.4 外泌體PCV2感染PK-15細(xì)胞
    2.5 外泌體介導(dǎo)PCV2感染淋巴細(xì)胞
    2.6 PCV2-外泌體對豬脾淋巴細(xì)胞增殖的影響
    2.7 PCV2-外泌體對豬脾淋巴細(xì)胞凋亡的影響
3 討 論
4 結(jié) 論



本文編號：3741736