本試驗以6月齡、1周歲和兩周歲的威寧綿羊和貴州半細毛羊公母羊為研究對象,利用分子手段對威寧綿羊和貴州半細毛羊JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導通路相關(guān)基因(SOCS7和GFAP)編碼區(qū)序列進行克隆,并進行生物信息學性分析。此外,本試驗同時采用實時熒光定量PCR的手段對SOCS7和GFAP兩個基因在威寧綿羊和貴州半細毛羊不同性別及不同生長階段心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、小腸及腦組織7個組織中mRNA水平上的表達規(guī)律進行探究,以期得到SOCS7和GFAP兩個基因在威寧綿羊和貴州半細毛羊各組織內(nèi)的表達規(guī)律。試驗的主要研究結(jié)果如下:(1)本試驗成功克隆得到威寧綿羊和貴州半細毛羊SOCS7基因的CDS區(qū)全序列,并發(fā)現(xiàn)了的兩種不同的可變剪接體,分別命名為SOCS7-V1和SOCS7-V2,進一步對序列進行比對發(fā)現(xiàn)兩種可變剪接體CDS區(qū)長度的不同是由于發(fā)生剪接時綿羊SOCS7基因第五外顯子和部分第六外顯子是否保留所引起的。SOCS7-V1基因CDS區(qū)長度為1827bp,編碼609個氨基酸,SOCS7-V2基因CDS區(qū)長度為1662bp,共編碼554個氨基酸,SOCS7-V2相比于SOCS7-V1缺少165b...

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1.1 中國綿羊產(chǎn)業(yè)概況
        1.1.1 我國綿羊存欄量
        1.1.2 我國羊毛產(chǎn)業(yè)
        1.1.3 我國羊肉產(chǎn)業(yè)
        1.1.4 貴州省綿羊產(chǎn)業(yè)概況
    1.2 威寧綿羊品種概述
    1.3 貴州半細毛羊品種概述
    1.4 JAK/STAT信號通路
        1.4.1 SOCS7基因
        1.4.2 GFAP基因
    1.5 高等生物可變剪接研究現(xiàn)狀
    1.6 研究目的及意義
第二章 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 試驗樣品
        2.1.2 主要試驗儀器
        2.1.3 主要試驗試劑
        2.1.4 1‰DEPC處理水的配制過程
        2.1.5 LB培養(yǎng)基的配制過程
        2.1.6 感受態(tài)細胞的培養(yǎng)(CaCl2法)
        2.1.7 5×TBE的配制
    2.2 試驗方法
        2.2.1 威寧綿羊和貴州半細毛羊采樣前準備
        2.2.2 威寧綿羊和貴州半細毛組織樣總RNA提取
        2.2.3 組織總RNA檢測
        2.2.4 cDNA第一條鏈合成
        2.2.5 引物的設(shè)計和合成
        2.2.6 PCR反應擴增目的序列
        2.2.7 基因CDS區(qū)克隆
        2.2.8 SOCS7基因部分CDS區(qū)克隆
        2.2.9 實時熒光定量PCR(qPCR)
    2.3 統(tǒng)計與分析數(shù)據(jù)
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 總RNA提取結(jié)果
    3.2 PCR擴增目的片段及CDS區(qū)克隆
    3.3 威寧綿羊和貴州半細毛羊SOCS7基因CDS區(qū)克隆
    3.4 威寧綿羊和貴州半細毛羊SOCS7基因克隆和序列分析
        3.4.1 威寧綿羊和貴州半細毛羊SOCS7及其可變剪接體的蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)分析
        3.4.2 威寧綿羊和貴州半細毛羊SOCS7可變剪接體的蛋白理化性質(zhì)分析
        3.4.3 威寧綿羊和貴州半細毛羊SOCS7基因可變剪接體編碼蛋白的疏水性與親水性預測
        3.4.4 威寧綿羊和貴州半細毛羊SOCS7可變剪接體蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)預測
    3.5 威寧綿羊和貴州半細毛羊GFAP基因克隆和序列分析
        3.5.1 威寧綿羊和貴州半細毛羊GFAP基因的蛋白理化性質(zhì)分析
        3.5.2 威寧綿羊和貴州半細毛羊GFAP基因編碼蛋白的疏水性與親水性預測
        3.5.3 威寧綿羊和貴州半細毛羊GFAP蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)預測
    3.6 實時熒光定量PCR
        3.6.1 威寧綿羊SOCS7、GFAP基因熒光定量PCR相關(guān)曲線
        3.6.2 貴州半細毛羊SOCS7、GFAP熒光定量PCR相關(guān)曲線
        3.6.3 威寧綿羊SOCS7基因表達規(guī)律
        3.6.4 威寧綿羊GFAP基因表達規(guī)律
        3.6.5 貴州半細毛羊SOCS7基因表達規(guī)律
        3.6.6 貴州半細毛羊GFAP基因表達規(guī)律
第四章 討論
    4.1 威寧綿羊和貴州半細毛羊SOCS7基因研究
    4.2 威寧綿羊和貴州半細毛羊GFAP基因研究
第五章 結(jié)論
參考文獻
致謝
附錄



本文編號：3739937