豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是近十多年來對我國生豬產(chǎn)業(yè)危害嚴(yán)重的動物疾病,其病原豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的傳染性較強(qiáng),可導(dǎo)致母豬繁殖障礙以及仔豬和育肥豬嚴(yán)重的呼吸系統(tǒng)疾病。在外界環(huán)境和免疫壓力下容易發(fā)生變異,不同PRRSV變異株其基因組遺傳特性和致病性也不盡相同,及時監(jiān)測PRRSV分離株遺傳變異特征,可為指導(dǎo)PRRSV科學(xué)防控策略的制定和有效疫苗的研制提供有益幫助。本研究中我們首先對566份發(fā)病豬臨床樣品進(jìn)行了PRRSV檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn)其中246份樣品呈PRRSV陽性。選擇其中部分陽性樣品的Nsp9、Nsp2和ORF5基因進(jìn)行序列分析。結(jié)果顯示:在PRRSV陽性樣品中,18株ORF5基因主要分布于L1、L3和L8三個譜系中;28株毒株Nsp2基因主要分布于L1、L5和L8三個譜系中;10株Nsp9基因分布于L1和L8兩個譜系中。氨基酸序列分析結(jié)果顯示,不同毒株間Nsp2基因存在4種...

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要符號對照表
第一章 緒論
    1.1 PRRSV概述
        1.1.1 PRRSV病原學(xué)
        1.1.2 PRRSV基因組結(jié)構(gòu)
        1.1.3 PRRSV結(jié)構(gòu)蛋白與功能
        1.1.4 PRRSV非結(jié)構(gòu)蛋白與功能
        1.1.5 PRRSV遺傳變異與重組機(jī)制
    1.2 我國PRRSV流行狀況與防控
    1.3 研究目的與意義
第二章 2017–2019年我國部分地區(qū)PRRSV分子流行病學(xué)分析
    2.1 材料
        2.1.1 臨床樣品采集
        2.1.2 主要試劑與儀器
        2.1.3 引物
    2.2 方法
        2.2.1 病料處理
        2.2.2 病料的RNA提取
        2.2.3 病毒cDNA的合成
        2.2.4 樣品檢測
        2.2.5 目的基因片段擴(kuò)增
        2.2.6 目的基因的PCR產(chǎn)物純化
        2.2.7 目的基因與載體連接
        2.2.8 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
        2.2.9 菌液PCR鑒定與測序
        2.2.10 遺傳進(jìn)化分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 樣品檢測結(jié)果
        2.3.2 PRRSV特異性片段的擴(kuò)增結(jié)果
        2.3.3 Nsp2基因的遺傳進(jìn)化和同源性分析
        2.3.4 Nsp2氨基酸序列比對
        2.3.5 ORF5基因的遺傳進(jìn)化及同源性分析
        2.3.6 GP5氨基酸序列比對
        2.3.7 Nsp9基因的遺傳進(jìn)化分析及同源性分析
        2.3.8 Nsp9氨基酸序列比對分析
    2.4 討論
第三章 HBap4/2018株的分離鑒定與遺傳變異分析
    3.1 材料
        3.1.1 病料
        3.1.2 抗體、病毒和細(xì)胞
        3.1.3 主要試劑與儀器
        3.1.4 引物合成
    3.2 方法
        3.2.1 PRRSV毒株的分離
        3.2.2 RT-PCR鑒定
        3.2.3 間接免疫熒光鑒定
        3.2.4 噬斑形態(tài)觀察
        3.2.5 病毒生長曲線繪制
        3.2.6 全長基因組擴(kuò)增與克隆測序
        3.2.7 PRRSV分離株的遺傳變異分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 病毒分離的CPE觀察
        3.3.2 分離毒株的RT-PCR鑒定
        3.3.3 間接免疫熒光鑒定
        3.3.4 病毒生長特性分析
        3.3.5 病毒全長基因擴(kuò)增
        3.3.6 分離毒株的全基因組遺傳進(jìn)化分析
        3.3.7 SHpd1/2018分離株的重組分析
        3.3.8 HBap4/2018分離株的重組分析
    3.4 討論
第四章 PRRSV自然重組毒HBap4/2018 對仔豬的致病性評價
    4.1 實驗材料及設(shè)備
        4.1.1 毒株與實驗豬
        4.1.2 主要試劑與儀器
    4.2 方法
        4.2.1 實驗動物篩選與分組
        4.2.2 實驗豬攻毒
        4.2.3 臨床癥狀觀察
        4.2.4 樣品采集及處理
        4.2.5 PRRSV抗體檢測
        4.2.6 病毒載量檢測
        4.2.7 血液中病毒滴度檢測
        4.2.8 血液中病毒的分離與鑒定
        4.2.9 剖檢及組織病理學(xué)觀察
        4.2.10 統(tǒng)計學(xué)分析
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 試驗豬臨床癥狀觀察
        4.3.2 體溫變化
        4.3.3 日增重變化
        4.3.4 試驗豬存活率統(tǒng)計
        4.3.5 血清中PRRSV抗體檢測
        4.3.6 鼻拭子排毒及病毒血癥檢測
        4.3.7 血液中病毒滴度檢測
        4.3.8 血液中病毒的分離與鑒定
        4.3.9 剖檢病理觀察
        4.3.10 組織病理變化
    4.4 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號：3738369