為鑒定適用于中國小反芻動(dòng)物慢病毒(Small ruminants lentivirus viruses,SRLVs)血清學(xué)診斷的通用蛋白標(biāo)記物,本研究以梅迪-維斯納病毒(Maedi-Visna virus,MVV)四川株為模板擴(kuò)增獲得gag基因序列,使用生物信息學(xué)方法分析其與中國山羊關(guān)節(jié)炎-腦炎病毒(Caprine arthritis encephalitis virus,CAEV)分離株gag蛋白氨基酸序列和抗原表位相似性,構(gòu)建gag基因重組表達(dá)載體并轉(zhuǎn)入BL21(DE3)宿主菌進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),采用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和Western blotting確定其大小、分布和反應(yīng)原性。結(jié)果顯示,MVV gag蛋白氨基酸序列與中國CAEV分離株的相似性為74.7%～74.9%,它的11個(gè)抗原表位與CAEV gag蛋白的12個(gè)抗原表位存在較高的序列相似性,推測其可作為中國SRLVs血清學(xué)診斷的通用蛋白質(zhì)標(biāo)記物;SDS-PAGE檢測結(jié)果顯示,重組gag蛋白大小約為55 000,主要以包涵體形式存在,Western blotting顯示該蛋白可與MVV和CAEV感染...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)材料
        1.1.1 菌(毒)株與載體
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 引物設(shè)計(jì)與合成
    1.2 試驗(yàn)方法
        1.2.1 病毒基因組DNA的提取
        1.2.2 MVV gag基因的PCR擴(kuò)增
        1.2.3 重組表達(dá)載體的構(gòu)建
        1.2.4 MVV和CAEV gag蛋白的生物信息學(xué)分析
        1.2.5 重組gag蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及Western blotting分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 MVV gag基因重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    2.2 gag蛋白氨基酸序列與抗原表位分析
    2.3 MVV gag重組質(zhì)粒的誘導(dǎo)表達(dá)與反應(yīng)原性分析
3 討 論



本文編號(hào)：3738060