TGF-β超家族作為信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞外配體調(diào)節(jié)細(xì)胞的分化、凋亡和增殖,在生殖細(xì)胞發(fā)育調(diào)控中起重要作用。GDF9屬于TGF-p超家族成員,在人、羊、鼠卵泡發(fā)育和排卵過(guò)程中發(fā)揮重要作用；此外,在鼠、貓、羊駝等動(dòng)物睪丸中檢測(cè)到了GDF9及其受體的表達(dá)。體外研究發(fā)現(xiàn),GDF9通過(guò)影響與鼠睪丸支持細(xì)胞緊密連接相關(guān)蛋白的表達(dá)與定位,可影響支持細(xì)胞間緊密連接功能。然而,GDF9及其受體在牛睪丸中的表達(dá)分布,以及GDF9是否參與牛支持細(xì)胞、腔前卵泡和胚胎發(fā)育的調(diào)節(jié)研究報(bào)道較少�；诖�,本研究從基因多態(tài)性著手,分析牛GDF9基因多態(tài)性與超數(shù)排卵效果、胚胎移植妊娠率以及精液品質(zhì)的關(guān)系；其次探討GDF9對(duì)牛腔前卵泡生長(zhǎng)發(fā)育與存活的作用;再者通過(guò)鑒定GDF9及其受體BMPRII和ALK5在牛睪丸的表達(dá)與分布,研究GDF9對(duì)牛睪丸支持細(xì)胞增殖與凋亡以及支持細(xì)胞緊密連接能力的作用,以探討GDF9對(duì)牛卵泡發(fā)育和精子發(fā)生及胚胎發(fā)育的作用及其機(jī)制。具體內(nèi)容如下：1、牛GDF9基因多態(tài)性對(duì)超數(shù)排卵效果、胚胎移植妊娠率以及精液品質(zhì)的影響利用候選基因法,采用PCR-SSCP、PCR-RFLP和測(cè)序等技術(shù),研究了GDF9基因在中...

【文章頁(yè)數(shù)】：123 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    1 GDF9研究進(jìn)展
        1.1 GDF9基本結(jié)構(gòu)
        1.2 GDF9信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
        1.3 GDF9對(duì)卵泡發(fā)育的調(diào)控
            1.3.1 生長(zhǎng)因子對(duì)卵泡發(fā)育的調(diào)控作用
            1.3.2 GDF9對(duì)卵泡發(fā)育的影響
        1.4 GDF9對(duì)睪丸發(fā)育和精子發(fā)生的影響
    2 腔前卵泡體外培養(yǎng)研究進(jìn)展
        2.1 卵泡生長(zhǎng)發(fā)育的一般規(guī)律和調(diào)控模式
        2.2 體外腔前卵泡培養(yǎng)研究進(jìn)展
    3 睪丸支持細(xì)胞與精子發(fā)生
        3.1 精子發(fā)生的過(guò)程及基因表達(dá)調(diào)控
        3.2 睪丸支持細(xì)胞在精子發(fā)生中的作用
    4 研究目的與意義
第二部分 試驗(yàn)研究
    實(shí)驗(yàn)一 牛GDF9基因多態(tài)性及其與超數(shù)排卵效果的關(guān)系
        1 引言
        2 材料與方法
            2.1 實(shí)驗(yàn)材料
                2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
                2.1.2 試驗(yàn)樣品的采集
                2.1.3 主要儀器設(shè)備
                2.1.4 主要酶、試劑和試劑盒
                2.1.5 主要溶液的配置
            2.2 研究方法
                2.2.1 中國(guó)荷斯坦奶牛超數(shù)排卵處理程序
                2.2.2 沖胚及數(shù)據(jù)收集
                2.2.3 �；蚪MDNA的提取及檢測(cè)
                2.2.4 PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)
                2.2.5 聚丙烯酰胺凝膠電泳和銀染檢測(cè)
                2.2.6 PCR-SSCP檢測(cè)
                2.2.7 目的片段回收純化
                2.2.8 引物設(shè)計(jì)及PCR反應(yīng)條件
                2.2.9 酶切位點(diǎn)的引入與基因分型
            2.3 統(tǒng)計(jì)分析
        3 結(jié)果
            3.1 基因組DNA提取物
            3.2 GDF9基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物
            3.3 GDF9基因SSCP多態(tài)性
            3.4 GDF9基因RFLP多態(tài)性
            3.5 GDF9基因型頻率和等位基因頻率
            3.6 GDF9基因多態(tài)性與奶牛超數(shù)排卵效果的關(guān)系
        4 討論
            4.1 GDF9基因突變對(duì)超數(shù)排卵的影響
            4.2 GDF9基因突變影響超數(shù)排卵的機(jī)制解析
        5 小結(jié)
    實(shí)驗(yàn)二：牛GDF9基因多態(tài)性及其與胚胎移植妊娠率的關(guān)系
        1 引言
        2 材料與方法
            2.1 材料
                2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
                2.1.2 試驗(yàn)樣品的采集
            2.2 方法
                2.2.1 受體牛同期發(fā)情處理
                2.2.2 胚胎移植及妊娠檢查
                2.2.3 基因組DNA提取
                2.2.4 GDF9基因多態(tài)性檢測(cè)
                2.2.5 血清激素濃度的測(cè)定
                2.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
        3 結(jié)果
            3.1 GDF9基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物
            3.2 GDF9基因多態(tài)性
            3.3 GDF9基因型頻率和等位基因頻率
            3.4 GDF9基因多態(tài)性與冷凍胚胎移植妊娠率的關(guān)系
            3.5 GDF9基因多態(tài)性與胚胎移植時(shí)受體血清激素的關(guān)系
        4 討論
            4.1 GDF9基因在魯西黃牛群體中具有多態(tài)性
            4.2 GDF9基因突變與胚胎移植妊娠率關(guān)系不大
        5 小結(jié)
    實(shí)驗(yàn)三：外源GDF9對(duì)牛腔前卵泡體外培養(yǎng)效果的影響
        1 引言
        2 材料與方法
            2.1 材料
                2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器設(shè)備
                2.1.2 主要試劑
                2.1.3 主要溶液配制
            2.2 方法
                2.2.1 卵巢皮質(zhì)的獲得
                2.2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與培養(yǎng)條件
                2.2.3 組織學(xué)檢測(cè)
                2.2.4 TUNEL檢測(cè)
                2.2.5 統(tǒng)計(jì)分析
        3 結(jié)果
            3.1 腔前卵泡活力
            3.2 原始卵泡的激活和生長(zhǎng)
            3.3 腔前卵泡生長(zhǎng)
        4 討論
        5 小結(jié)
    實(shí)驗(yàn)四：牛GDF9基因多態(tài)性及其與精液品質(zhì)的關(guān)系
        1 引言
        2 材料與方法
            2.1 試驗(yàn)動(dòng)物與數(shù)據(jù)收集
            2.2 試驗(yàn)方法
                2.2.1 牛凍精基因組DNA提取
                2.2.2 GDF9基因多態(tài)性檢測(cè)
                2.2.3 統(tǒng)計(jì)分析
        3 結(jié)果
            3.1 GDF9基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物
            3.2 GDF9基因多態(tài)性
            3.3 GDF9基因型頻率和等位基因頻率
            3.4 GDF9基因多態(tài)性與荷斯坦種公牛精液品質(zhì)的關(guān)系
        4 討論
        5 小結(jié)
    實(shí)驗(yàn)五：GDF9及其受體在牛睪丸、睪丸支持細(xì)胞中的鑒定
        1 引言
        2 材料與方法
            2.1 材料
                2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
                2.1.2 主要儀器設(shè)備
                2.1.3 主要試劑及試劑盒
            2.2 實(shí)驗(yàn)方法
                2.2.1 牛睪丸支持細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
                2.2.2 牛睪丸組織與支持細(xì)胞總RNA提取及檢測(cè)
                2.2.3 cDNA第一鏈合成
                2.2.4 PCR反應(yīng)程序和產(chǎn)物檢測(cè)
                2.2.5 蛋白的提取及Western blot檢測(cè)
                2.2.6 免疫組織化學(xué)染色
        3 結(jié)果
            3.1 牛睪丸組織和支持細(xì)胞中提取總RNA質(zhì)量檢測(cè)
            3.2 GDF9及其受體在牛睪丸支持細(xì)胞中的表達(dá)
            3.3 GDF9及其受體在牛睪丸組織中的表達(dá)
            3.4 GDF9蛋白在牛睪丸組織和支持細(xì)胞中的表達(dá)與分布
        4 討論
        5 小結(jié)
    實(shí)驗(yàn)六：外源GDF9對(duì)牛睪丸支持細(xì)胞發(fā)育和功能的影響
        1 引言
        2 材料與方法
            2.1 材料
                2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
                2.1.2 主要儀器設(shè)備
                2.1.3 主要試劑及配置
            2.2 實(shí)驗(yàn)方法
                2.2.1 牛睪丸支持細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
                2.2.2 外源GDF9的處理
                2.2.3 牛支持細(xì)胞總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
                2.2.4 細(xì)胞周期檢測(cè)
                2.2.5 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
                2.2.6 細(xì)胞增殖檢測(cè)
                2.2.7 跨膜電阻值測(cè)定
                2.2.8 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
                2.2.9 統(tǒng)計(jì)分析
        3 結(jié)果
            3.1 GDF9影響牛支持細(xì)胞周期
            3.2 GDF9促進(jìn)牛支持細(xì)胞增殖
            3.3 GDF9抑制牛支持細(xì)胞凋亡
            3.5 GDF9對(duì)牛occludin和claudin-11 mRNA表達(dá)的影響
            3.6 GDF9對(duì)牛支持細(xì)胞緊密連接能力的影響
        4 討論
        5 小結(jié)
第三部分 全文結(jié)論
第四部分 創(chuàng)新點(diǎn)和不足
    本研究的創(chuàng)新之處
    本研究的不足之處
參考文獻(xiàn)
發(fā)表的主要論文
致謝



本文編號(hào)：3737467