發(fā)布時(shí)間：2023-02-07 17:47

　　小反芻獸疫（peste des petits ruminants,PPR）是由副粘病毒科（Paramyxoviridae）麻疹病毒屬（Morbillivirus）小反芻獸疫病毒（peste des petits ruminants virus,PPRV）感染小反芻動(dòng)物而引起的一種急性傳染病,臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、口炎、腹瀉和肺炎等特征,發(fā)病過(guò)程以高發(fā)病率和高死亡率為特征。我國(guó)西藏阿里地區(qū)于2007年首次暴發(fā),近兩年,新疆、內(nèi)蒙古自治區(qū)、遼寧、山東、湖南、安徽、廣西、云南、貴州等地相繼發(fā)生疫情,小反芻獸疫防控任務(wù)十分嚴(yán)峻,有效防控小反芻獸疫的相關(guān)生物制品的研發(fā)勢(shì)在必行。但截至目前,PPRV的致病機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。因此,建立PPRV的反向遺傳學(xué)技術(shù)操作平臺(tái)就顯得十分重要。國(guó)內(nèi)外學(xué)者為深入了解本病的發(fā)病機(jī)理,為新型載體疫苗的研制提供基礎(chǔ),開(kāi)展了PPRV感染性克隆的相關(guān)研究工作。本研究結(jié)合當(dāng)前副黏病毒科病毒感染性克隆和麻疹病毒感染性克隆的研究方法的基礎(chǔ)上,通過(guò)對(duì)pBluescript?II KS（+）載體和pVAX1載體的改造,獲得可作為通用型負(fù)鏈不分節(jié)段RNA病毒的反向遺傳載體,pBKS-H... 

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 綜述
    1.1 麻疹病毒屬反向遺傳研究進(jìn)展
        1.1.1 麻疹病毒的感染性克隆
        1.1.2 牛瘟病毒的感染性克隆
        1.1.3 犬瘟熱病毒的感染性克隆
        1.1.4 小反芻獸疫病毒的感染性克隆
    1.2 反向遺傳操作系統(tǒng)
        1.2.1 基于T7 RNA聚合酶的反向遺傳操作系統(tǒng)
        1.2.2 基于RNA聚合酶II的反向遺傳操作系統(tǒng)
    1.3 麻疹病毒屬重要受體
        1.3.1 CD150/Signaling Lymphocyte Activation Molecule (SLAM)
        1.3.2 Nectin 4/Poliovirus receptor-related 4(PVRL4)
        1.3.3 CD46/Membrane Cofactor Protein (MCP)
        1.3.4 CD209/Dendritic Cell-Specific Intracellular Adhesion Molecule3-Grabbing Nonintegrin (DC-SIGN)
        1.3.5 CD147/Extracellular Matrix Metalloproteinase Inducer (EMMPRIN)
        1.3.6 Neurokinin-1 (NK-1)
    1.4 研究目的及意義
第二章 小反芻獸疫病毒全長(zhǎng)基因組及微基因組的構(gòu)建
    2.1 材料
        2.1.1 病毒、菌種和細(xì)胞
        2.1.2 載體與主要試劑
    2.2 方法
        2.2.1 引物設(shè)計(jì)
        2.2.2 PPRV TCID50的測(cè)定
        2.2.3 PPRV cDNA的制備
        2.2.4 目的基因的RT-PCR擴(kuò)增及鑒定
        2.2.5 構(gòu)建帶有核酶的載體
        2.2.6 全長(zhǎng)cDNA的連接
        2.2.7 輔助質(zhì)粒的構(gòu)建及酶切鑒定
        2.2.8 輔助質(zhì)粒的活性鑒定
        2.2.9 微基因組的構(gòu)建及鑒定
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 TCID50的測(cè)定
        2.3.2 RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果
        2.3.3 陽(yáng)性質(zhì)粒的鑒定結(jié)果
        2.3.4 F1F2片段的連接及鑒定
        2.3.5 F3F4片段的連接及鑒定
        2.3.6 F5F6F7片段的連接及鑒定
        2.3.7 全長(zhǎng)的連接及鑒定
        2.3.8 全長(zhǎng)測(cè)序結(jié)果
        2.3.9 輔助性質(zhì)粒的構(gòu)建方法
        2.3.10 輔助性質(zhì)粒的鑒定
        2.3.11 輔助性質(zhì)粒的活性鑒定結(jié)果
        2.3.12 微基因組的構(gòu)建方法
        2.3.13 微基因組的鑒定
        2.3.14 PPRV微基因組的拯救
    2.4 討論
第三章 山羊SLAM受體細(xì)胞系的構(gòu)建及鑒定
    3.1 材料
        3.1.1 病毒、菌種和細(xì)胞
        3.1.2 載體與主要試劑
    3.2 方法
        3.2.1 SLAM基因的擴(kuò)增及鑒定
        3.2.2 SLAM基因的氨基酸分析
        3.2.3 SLAM基因穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞制備及鑒定
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 PCR擴(kuò)增結(jié)果
        3.3.2 酶切鑒定結(jié)果
        3.3.3 SLAM基因的氨基酸分析結(jié)果
        3.3.4 p Display-SLAM的酶切鑒定
        3.3.5 RT-PCR的鑒定
        3.3.6 Western Blot鑒定
        3.3.7 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的接毒實(shí)驗(yàn)
    3.4 討論
第四章 H蛋白與SLAM受體相互作用的研究
    4.1 材料
        4.1.1 病毒、菌種和細(xì)胞
        4.1.2 載體與主要試劑
    4.2 方法
        4.2.1 PPRV H蛋白分析
        4.2.2 H與SLAM受體相互作用預(yù)測(cè)
        4.2.3 H蛋白胞外區(qū)的表達(dá)及分段表達(dá)
        4.2.4 SLAM基因的表達(dá)
        4.2.5 PPRV Nigeria 75/1 克隆株H蛋白與山羊SLAM受體相互作用
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 PPRV H蛋白分析結(jié)果
        4.3.2 H蛋白與SLAM受體蛋白模型預(yù)測(cè)結(jié)果
        4.3.3 PPRV Nigeria 75/1 克隆株、PPRV Nigeria 75/1 疫苗株的H蛋白與不同SLAM受體相互作用預(yù)測(cè)結(jié)果
        4.3.4 Tibet 07 株H蛋白不同SLAM相互作用預(yù)測(cè)結(jié)果
        4.3.5 PPRV Nigeria 75/1 克隆株和Tibet 07 株H基因的擴(kuò)增及鑒定結(jié)果
        4.3.6 山羊SLAM受體胞外區(qū)的擴(kuò)增及鑒定結(jié)果
        4.3.7 PPRV Nigeria 75/1 克隆株H蛋白與山羊SLAM受體相互作用結(jié)果
    4.4 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3737191