羊絨是重要的高端紡織品原材料,隨著世界范圍內(nèi)羊絨市場的日益擴(kuò)大,對羊絨產(chǎn)量及質(zhì)量的要求也日益提高。絨山羊作為我國優(yōu)良的畜種,其羊絨品質(zhì)優(yōu)良,但多年來在絨山羊選育中為了提高羊絨產(chǎn)量盲目進(jìn)行雜交,造成山羊平均產(chǎn)絨量和羊絨質(zhì)量降低、傳統(tǒng)良種和改良品種所占比例不高等問題。利用現(xiàn)代生物技術(shù)對絨山羊進(jìn)行分子育種是今后絨山羊育種的重要方向。胸腺素β4具有多種生物學(xué)功能,其對毛發(fā)生長的促進(jìn)作用已在很多研究中被證實,但作用機(jī)制還沒有明確的定論。本研究在利用基因編輯技術(shù)獲得Tβ4基因定點整合絨山羊的基礎(chǔ)上,對Tβ4基因定點整合絨山羊進(jìn)行鑒定及健康狀況評價,觀察Tβ4基因?qū)q山羊絨毛生長的影響,利用Tβ4基因定點整合絨山羊進(jìn)行擴(kuò)繁并對后代進(jìn)行檢測,進(jìn)一步結(jié)合轉(zhuǎn)錄組學(xué)及蛋白組學(xué)分析探究Tβ4基因促進(jìn)絨毛生長的機(jī)制,為今后利用基因編輯技術(shù)培育高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)絨山羊提供理論依據(jù)。一、Tβ4基因定點整合絨山羊的檢測1、Tβ4基因定點整合絨山羊的鑒定及健康狀況評價本研究在利用CRISPR/Cas9結(jié)合體細(xì)胞核移植技術(shù)獲得了Tβ4基因在CCR5位點定點整合絨山羊的基礎(chǔ)上,對該基因編輯絨山羊進(jìn)行了southern blot檢測、... 

【文章頁數(shù)】：136 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 Tβ4基因促進(jìn)毛發(fā)生長的研究進(jìn)展
    1.1 Tβ4的分子和生化特性
    1.2 Tβ4在細(xì)胞內(nèi)的定位
    1.3 Tβ4的功能研究進(jìn)展
        1.3.1 肌動蛋白結(jié)合蛋白
        1.3.2 角膜修復(fù)及抗炎
        1.3.3 加速皮膚傷口愈合
    1.4 Tβ4促進(jìn)毛發(fā)生長的研究進(jìn)展
        1.4.1 Tβ4通過激活毛囊干細(xì)胞促進(jìn)毛發(fā)生長
        1.4.2 過表達(dá)Tβ4促進(jìn)牙齒異常發(fā)育及促進(jìn)毛發(fā)生長
        1.4.3 Tβ4 激活P38/ERK/AKT信號通路促進(jìn)毛發(fā)生長
        1.4.4 Tβ4 激活Wnt/β-catenin/ Lef-1 信號通路
        1.4.5 Tβ4過表達(dá)增加絨山羊次級毛囊個數(shù)
    1.5 結(jié)語
第二章 Tβ4基因定點整合絨山羊的檢測
    前言
    第一節(jié) Tβ4基因定點整合絨山羊的鑒定及健康狀況評價
        2.1 實驗材料
            2.1.1 儀器設(shè)備
            2.1.2 試劑耗材
        2.2 實驗方法
            2.2.1 Southern blot檢測
            2.2.2 Real-time PCR檢測
            2.2.3 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測
            2.2.4 脫靶分析
            2.2.5 基因位點檢測
            2.2.6 生長狀況監(jiān)測
            2.2.7 血常規(guī)檢測
        2.3 結(jié)果
            2.3.1 Southern blot檢測
            2.3.2 Real-time PCR檢測
            2.3.3 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測
            2.3.4 脫靶分析
            2.3.5 基因位點檢測
            2.3.6 生長狀況監(jiān)測
            2.3.7 血常規(guī)檢測
        2.4 討論
    第二節(jié) Tβ4基因定點整合絨山羊產(chǎn)絨性能的檢測
        3.1 實驗材料
            3.1.1 儀器設(shè)備
            3.1.2 試劑耗材
        3.2 實驗方法
            3.2.1 石蠟切片及HE染色
            3.2.2 免疫組織化學(xué)
            3.2.3 絨樣檢測
        3.3 結(jié)果
            3.3.1 石蠟切片及HE染色
            3.3.2 免疫組織化學(xué)
            3.3.3 絨樣檢測
        3.4 討論
    第三節(jié) Tβ4基因定點整合絨山羊的擴(kuò)繁及后代的檢測
        4.1 實驗材料
            4.1.1 儀器設(shè)備
            4.1.2 試劑耗材
        4.2 實驗方法
            4.2.1 Tβ4基因定點整合絨山羊的超數(shù)排卵
            4.2.2 胚胎移植
            4.2.3 子一代PCR檢測
            4.2.4 子一代Real-time PCR檢測
            4.2.5 皮膚組織石蠟切片及HE染色
            4.2.6 免疫組化
            4.2.7 絨山羊各組織器官Tβ4 基因m RNA表達(dá)水平的檢測
            4.2.8 血常規(guī)檢測
        4.3 結(jié)果
            4.3.1 超數(shù)排卵
            4.3.2 胚胎移植
            4.3.3 子一代PCR檢測
            4.3.4 子一代Real-time PCR檢測
            4.3.5 石蠟切片及HE染色
            4.3.6 免疫組化
            4.3.7 絨山羊各組織器官Tβ4 基因m RNA表達(dá)水平的檢測
            4.3.8 血常規(guī)檢測
        4.4 討論
第三章 Tβ4基因促進(jìn)絨山羊絨毛生長的機(jī)制研究
    前言
    第一節(jié) Tβ4基因定點整合絨山羊的轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析
        5.1 實驗材料
        5.2 實驗方法
            5.2.1 絨山羊皮膚樣本RNA的提取
            5.2.2 質(zhì)控數(shù)據(jù)統(tǒng)計
            5.2.3 序列比對分析
            5.2.4 轉(zhuǎn)錄組質(zhì)量評估
            5.2.5 轉(zhuǎn)錄本組裝
            5.2.6 轉(zhuǎn)錄組功能注釋
            5.2.7 表達(dá)量分析
            5.2.8 表達(dá)量差異統(tǒng)計
        5.3 結(jié)果
            5.3.1 絨山羊皮膚樣本RNA的提取
            5.3.2 質(zhì)控數(shù)據(jù)統(tǒng)計
            5.3.3 序列比對分析
            5.3.4 轉(zhuǎn)錄組質(zhì)量評估
            5.3.5 轉(zhuǎn)錄本組裝
            5.3.6 表達(dá)量差異統(tǒng)計
            5.3.7 差異表達(dá)基因的分析
            5.3.8 差異表達(dá)基因的驗證
        5.4 討論
    第二節(jié) Tβ4基因定點整合絨山羊的蛋白組學(xué)分析及關(guān)聯(lián)分析
        6.1 實驗材料
            6.1.1 儀器設(shè)備
            6.1.2 試劑耗材
        6.2 實驗方法
            6.2.1 皮膚組織總蛋白提取
            6.2.2 總蛋白質(zhì)濃度測定
            6.2.3 聚丙烯酰胺凝膠電泳
            6.2.4 還原烷基化和酶解
            6.2.5 iTRAQ標(biāo)記
            6.2.6 高p HUPLC第一維分離
            6.2.7 液相串聯(lián)質(zhì)譜
            6.2.8 數(shù)據(jù)質(zhì)控評估
            6.2.9 全蛋白功能注釋
            6.2.10 差異蛋白分析
            6.2.11 蛋白組與轉(zhuǎn)錄組關(guān)聯(lián)分析
            6.2.12 關(guān)聯(lián)分析的驗證
        6.3 結(jié)果
            6.3.1 蛋白濃度測定
            6.3.2 數(shù)據(jù)質(zhì)控評估
            6.3.3 差異蛋白統(tǒng)計
            6.3.4 差異蛋白分析
            6.3.5 蛋白組與轉(zhuǎn)錄組關(guān)聯(lián)分析
            6.3.6 關(guān)聯(lián)分析的驗證
        6.4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及發(fā)明專利


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]2018年度內(nèi)蒙古自治區(qū)山羊絨、綿羊毛公證檢驗質(zhì)量分析報告[J]. 王莉,邱瑞卿,呂曉紅,鄒俊.  中國纖檢. 2019(02)
[2]轉(zhuǎn)基因動物及其產(chǎn)品的主要管理制度[J]. 李曉琳,吳紹強(qiáng),劉曉飛,王勤,景宏麗,仇松寅,林祥梅.  畜牧與獸醫(yī). 2019(02)
[3]2017年度內(nèi)蒙古自治區(qū)山羊絨、綿羊毛公證檢驗質(zhì)量分析報告[J]. 王莉,邱瑞卿,呂曉紅,鄒俊.  中國纖檢. 2018(03)
[4]2016年度內(nèi)蒙古自治區(qū)山羊絨、綿羊毛公證檢驗質(zhì)量分析報告[J]. 王莉,邱瑞卿,呂曉紅,鄒俊.  中國纖檢. 2017(04)
[5]sgRNAcas9軟件圖形用戶界面開發(fā)及應(yīng)用[J]. 趙長志,張懿,李廣磊,陳濟(jì)良,李京津,任瑞敏,倪攀,趙書紅,謝勝松.  遺傳. 2015(10)
[6]中國山羊絨品質(zhì)分析(二)[J]. 田文亮.  中國纖檢. 2015(03)
[7]加強(qiáng)絨山羊育種工作推動絨山羊產(chǎn)業(yè)由數(shù)量型向質(zhì)量效益型轉(zhuǎn)變[J]. 鄭友民.  中國畜牧業(yè). 2014(21)
[8]絨山羊育種中的絨毛品質(zhì)檢測方法[J]. 王紅光.  湖北畜牧獸醫(yī). 2014(11)
[9]不同因素對奶牛超數(shù)排卵效果影響的研究[J]. 薛仰全,倪興軍,余四九.  中國草食動物科學(xué). 2013(05)
[10]轉(zhuǎn)錄組研究新技術(shù):RNA-Seq及其應(yīng)用[J]. 祁云霞,劉永斌,榮威恒.  遺傳. 2011(11)

博士論文
[1]基于蛋白組學(xué)與轉(zhuǎn)錄組學(xué)的奶牛子宮內(nèi)膜炎補(bǔ)體機(jī)制研究[D]. 張世棟.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2018
[2]家蠶基質(zhì)金屬蛋白酶家族MMPs及組織金屬蛋白酶抑制劑TIMP在家蠶中的功能研究[D]. 劉太行.西南大學(xué) 2017
[3]大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞G蛋白偶聯(lián)信號通路與MAPK信號通路的關(guān)系及白芍總苷的作用[D]. 鄭詠秋.安徽醫(yī)科大學(xué) 2004

碩士論文
[1]優(yōu)質(zhì)和牛超數(shù)排卵和胚胎移植技術(shù)的研究與應(yīng)用[D]. 隋鶴鳴.吉林大學(xué) 2018
[2]CRISPR/Cas9介導(dǎo)絨山羊Tβ4基因定點敲入的研究[D]. 李曉聰.內(nèi)蒙古大學(xué) 2017
[3]不同能量水平日糧對內(nèi)蒙古白絨山羊生殖激素、泌乳性能及初生羔羊發(fā)育狀況的影響[D]. 李康.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[4]VEGF165通過MAPK信號通路調(diào)節(jié)uPA蛋白表達(dá)的實驗研究[D]. 黃鸝.南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2015
[5]蒙古阿爾巴斯白絨山羊毛囊發(fā)育過程中VEGF相關(guān)信號通路的研究[D]. 劉柳.內(nèi)蒙古大學(xué) 2015



本文編號：3733435