試驗(yàn)旨在分離鑒定犬臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的外泌體（UC-MSC-Exo）,并研究犬UC-MSC-Exo來源miRNA的表達(dá)情況及其對血管內(nèi)皮細(xì)胞（VEC）增殖的影響。采用超高速離心法從犬臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清中分離外泌體,采用Western blotting、透射電鏡和納米顆粒跟蹤分析法（NTA）進(jìn)行鑒定。通過對犬UC-MSC-Exo中的miRNA進(jìn)行測序,篩選出2個目標(biāo)miRNA（cfa-miR-34a和cfa-miR-143）并合成相應(yīng)的mimic和inhibitor,轉(zhuǎn)染犬VEC;采用熒光顯微鏡和實(shí)時熒光定量PCR法檢測mimic和inhibitor轉(zhuǎn)染情況及其轉(zhuǎn)染效率;CCK-8法檢測轉(zhuǎn)染mimic和inhibitor對犬VEC增殖能力的影響,并對其靶基因進(jìn)行預(yù)測。結(jié)果顯示,犬UC-MSC-Exo表達(dá)特異性的外泌體表面蛋白CD9、CD63和CD81,粒徑集中在100～200 nm,電鏡檢測成典型的杯狀。免疫熒光結(jié)果表明,miRNA mimic和inhibitor均已轉(zhuǎn)染進(jìn)細(xì)胞內(nèi),并且聚集于細(xì)胞質(zhì)中;實(shí)時熒光定量PCR結(jié)果表明,轉(zhuǎn)染cfa-miR-34a mimic和cfa-mi... 

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 犬UC-MSC-Exo的分離
        1.2.2 犬UC-MSC-Exo的鑒定
        1.2.3 犬UC-MSC-Exo miRNA測序
        1.2.4 目標(biāo)miRNA篩選
        1.2.5 VEC的分離培養(yǎng)
        1.2.6 熒光顯微鏡觀察mimic和inhibitor轉(zhuǎn)染情況
        1.2.7 實(shí)時熒光定量PCR法檢測mimic和inhibitor轉(zhuǎn)染效率
        1.2.8 CCK-8法檢測細(xì)胞增殖情況
        1.2.9 cfa-miR-34a和cfa-miR-143靶基因預(yù)測
2 結(jié) 果
    2.1 外泌體的鑒定結(jié)果
    2.2 外泌體miRNA測序結(jié)果
    2.3 miRNAs轉(zhuǎn)染效果檢測
    2.4 miRNAs對VEC增殖影響
    2.5 cfa-miR-34a和cfa-miR-143靶基因預(yù)測
3 討 論
4 結(jié) 論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]犬臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體對血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和凋亡的調(diào)控作用[J]. 詹小舒,羅惠娜,羅冬章,陳勝鋒,王丙云,白銀山,陳志勝,劉璨穎,計(jì)慧琴.  中國組織工程研究. 2019(29)
[2]外泌體的功能及其在臨床應(yīng)用中的研究進(jìn)展[J]. 楊金鑫,王海軍,趙永坤,裴志花,孫明潔,王開,胡桂學(xué).  中國畜牧獸醫(yī). 2018(12)
[3]犬臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體修復(fù)皮膚創(chuàng)傷[J]. 詹小舒,羅冬章,王丙云,盧瑜,冼偉杭,藍(lán)奕琦,郭建波,羅惠娜,白銀山,計(jì)慧琴,陳勝鋒,陳志勝,劉璨穎.  中國組織工程研究. 2018(25)
[4]骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植修復(fù)皮膚創(chuàng)傷[J]. 張貝瑩,羅冬章,麥海濤,陳祥浪,郭彥,王丙云,陳勝鋒,陳志勝.  中國組織工程研究. 2017(29)



本文編號：3731590