豬流行性腹瀉（PED）是由豬流行性腹瀉病毒（PEDV）引起豬的一種高度接觸性的急性腸道傳染病,主要以嘔吐、水樣腹瀉和脫水為特征。2010年以來(lái),我國(guó)多個(gè)地區(qū)突然爆發(fā)由PEDV變異株引起的初生仔豬腹瀉,其臨床癥狀、發(fā)病率和死亡率均較此前常見的PED嚴(yán)重,給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前對(duì)PEDV的致病性與免疫特征了解不夠深入,缺乏標(biāo)準(zhǔn)防控程序,本研究旨在探索PEDV流行毒株與宿主間的感染免疫特性,為進(jìn)一步闡明該病的發(fā)病機(jī)制奠定基礎(chǔ)。用自河北省某豬場(chǎng)分離的PEDV HBMC/2012株分別感染3日齡和21日齡健康仔豬,評(píng)價(jià)該毒株的致病性。3日齡仔豬感染后2-3 d（dpi）出現(xiàn)嚴(yán)重的腹瀉和嘔吐等典型癥狀,持續(xù)3 d左右逐漸好轉(zhuǎn),感染后8 h即可在肛拭子中檢測(cè)到病毒,并一直持續(xù)到實(shí)驗(yàn)結(jié)束（13 d）。剖檢可見小腸壁變薄,腸絨毛脫落或增粗,內(nèi)充滿淡黃色內(nèi)容物,部分小腸內(nèi)充滿氣體,腸系膜淋巴結(jié)出血。21日齡仔豬的臨床表現(xiàn)較3日齡仔豬輕,感染后2 d出現(xiàn)不同程度的腹瀉,沒有出現(xiàn)嘔吐癥狀,病理變化也較輕。感染后3、7 d在血清和腸道內(nèi)可檢測(cè)到病毒核酸,感染后23 d在相應(yīng)樣品內(nèi)未檢測(cè)到。免疫組化檢... 

【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 豬流行性腹瀉概述
        1.1.1 PEDV及其主要分子特征
        1.1.2 培養(yǎng)特性
        1.1.3 流行特征與致病性
        1.1.4 防治
    1.2 腸免疫屏障
        1.2.1 腸黏膜屏障的構(gòu)成
        1.2.2 肥大細(xì)胞
        1.2.3 CD163
        1.2.4 MUC2
        1.2.5 炎癥中的細(xì)胞性滲出物
        1.2.6 腸道黏膜免疫調(diào)節(jié)機(jī)制
    1.3 研究?jī)?nèi)容和技術(shù)路線
        1.3.1 研究?jī)?nèi)容
        1.3.2 技術(shù)路線
    1.4 研究目的與意義
    1.5 研究目標(biāo)
2 材料
    2.1 細(xì)胞及毒株
    2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.3 主要試劑
        2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)用溶液
        2.3.2 瓊脂糖凝膠電泳用溶液
        2.3.3 淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)用溶液
        2.3.4 流式細(xì)胞術(shù)所用的標(biāo)記抗體
        2.3.5 腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞分離用溶液
        2.3.6 組織切片與免疫組化用試劑
        2.3.7 其它試劑
    2.4 主要儀器
3 方法
    3.1 引物的設(shè)計(jì)與合成
    3.2 PEDV HBMC/2012 株細(xì)胞毒的制備
    3.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分組與感染
        3.3.1 動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)Ⅰ
        3.3.2 動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)Ⅱ
    3.4 樣品的采集與處理
    3.5 肉眼及組織學(xué)病理檢測(cè)
        3.5.1 肉眼病理檢查
        3.5.2 組織病理變化檢查
    3.6 病毒檢測(cè)
        3.6.1 RT-PCR方法
        3.6.2 免疫組化方法
    3.7 抗體檢測(cè)
    3.8 淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        3.8.1 外周血淋巴細(xì)胞的分離
        3.8.2 腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞的分離
        3.8.3 淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)——MTT法
    3.9 免疫細(xì)胞亞群含量的流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)
    3.10 腸黏膜中MC及具有CD163、MUC2 和SWC1A、SWC8 分子標(biāo)志免疫細(xì)胞的檢測(cè)
4 結(jié)果與分析
    4.1 臨床癥狀
    4.2 肉眼與組織病變
    4.3 病毒血癥
    4.4 病毒排出
    4.5 病毒在組織中的分布
    4.6 血清中PEDV抗體動(dòng)態(tài)
    4.7 外周血淋巴細(xì)胞及腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞的增殖活性
        4.7.1 外周血淋巴細(xì)胞的增殖活性
        4.7.2 PEDV感染仔豬腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞的增殖活性
    4.8 PEDV感染仔豬外周血T淋巴細(xì)胞亞群的含量變化
    4.9 腸黏膜中MC及具有CD163、MUC2 和SWC1A、SWC8 分子標(biāo)志免疫細(xì)胞的檢測(cè)結(jié)果
        4.9.1 MC在腸黏膜中的分布
        4.9.2 具有CD163 標(biāo)志的免疫細(xì)胞在腸黏膜中的分布
        4.9.3 具有MUC2 標(biāo)志的免疫細(xì)胞在腸黏膜中的分布
        4.9.4 具有SWC1a、SWC8 標(biāo)志的免疫細(xì)胞在腸黏膜中的分布
5 討論
    5.1 PEDV的致病性
        5.1.1 臨床癥狀及病理變化
        5.1.2 病毒血癥、排出及其在仔豬組織中的分布
    5.2 PEDV HBMC/2012 的免疫學(xué)特性
        5.2.1 全身免疫特性
        5.2.2 局部免疫研究
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及獲得的獎(jiǎng)勵(lì)
作者簡(jiǎn)介
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3729041