乳腺是哺乳動物特有的器官,乳腺的功能是泌乳。哺乳動物乳腺經(jīng)歷了形態(tài)和結(jié)構(gòu)上-系列的變化,這些變化與乳腺的物質(zhì)代謝密切相關(guān),乳腺物質(zhì)代謝直接影響乳的質(zhì)量和產(chǎn)量。目前尚缺乏對乳腺物質(zhì)代謝的系統(tǒng)研究。 本實驗以荷斯坦奶牛為實驗材料,采用熒光定量PCR技術(shù)檢測αs1-casein、αs2-casein、 β-casein、κ-casein、β-lactoglobin、WAP基因在乳腺發(fā)育各時期的表達,結(jié)果顯示,這些蛋白質(zhì)基因在泌乳期表達均上調(diào)。PCR技術(shù)檢測與乳腺蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄和翻譯作用相關(guān)的PRLR、 AKT1、STAT5、 ELF5、EIF4EBP1、S6K基因表達,結(jié)果顯示,EIF4EBP1的基因表達下調(diào),其它基因表達上調(diào),并且與乳蛋白質(zhì)基因表達趨勢基本一致,提示EIF4EBP1對泌乳具有抑制作用,其它基因在轉(zhuǎn)錄或翻譯水平調(diào)控乳蛋白質(zhì)的合成。PRLR通過JAK2激活STAT5在轉(zhuǎn)錄水平發(fā)揮作用,AKT1則通過mTOR對EIF4EBP1的負調(diào)控和對S6K的正調(diào)控在翻譯水平發(fā)揮作用。采用HPLC方法檢測乳腺中β-酪蛋白,最早出現(xiàn)在妊娠6個月。 采用熒光定量PCR技術(shù)檢測乳腺發(fā)育各... 

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 乳腺物質(zhì)代謝特點
        1.1.1 乳蛋白的合成
        1.1.2 乳脂的合成
        1.1.3 乳糖的合成
        1.1.4 乳腺葡萄糖的吸收
    1.2 乳腺發(fā)育研究進展
        1.2.1 乳腺發(fā)育概述
        1.2.2 乳腺組織學發(fā)育
    1.3 催乳素對乳腺發(fā)育及泌乳調(diào)控
        1.3.1 PRL及其受體結(jié)構(gòu)
        1.3.2 PRL在乳腺發(fā)育及泌乳中的作用
    1.4 催乳素主要的信號傳導通路對乳腺發(fā)育及物質(zhì)代謝調(diào)節(jié)
        1.4.1 JAK-STAT信號途徑
        1.4.2 AKT信號途徑
    1.5 研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 奶牛乳腺蛋白質(zhì)代謝研究
        2.1.1 編碼乳蛋白的基因表達
        2.1.2 調(diào)控乳蛋白合成的部分基因表達
        2.1.3 高效液相色譜法檢測乳腺及乳中的酪蛋白
    2.2 奶牛乳腺脂代謝研究
        2.2.1 血清甘油三酯和總膽固醇的測定
        2.2.2 乳腺脂代謝主要酶及調(diào)節(jié)因子mRNA的表達
        2.2.3 乳中游離脂肪酸的檢測
    2.3 奶牛乳腺糖代謝研究
        2.3.1 血清葡萄糖濃度測定
        2.3.2 糖代謝相關(guān)基因的mRNA檢測
        2.3.3 Western blotting檢測GLUT1蛋白在乳腺中的表達
        2.3.4 免疫熒光方法檢測GLUT1蛋白在乳腺中的表達定位
        2.3.5 高效液相色譜法檢測乳腺及乳中的乳糖
    2.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析
3 結(jié)果
    3.1 不同發(fā)育時期奶牛乳腺蛋白質(zhì)代謝
        3.1.1 編碼乳蛋白質(zhì)基因的表達
        3.1.2 調(diào)控乳蛋白合成的部分基因表達
        3.1.3 HPLC檢測乳腺及乳中的酪蛋白
    3.2 不同發(fā)育時期奶牛乳腺脂代謝
        3.2.1 血清甘油三酯和總膽固醇的測定
        3.2.2 奶牛乳腺脂肪酸的吸收、活化及運輸
        3.2.3 脂肪酸合成及去飽和
        3.2.4 甘油三酯和乳脂滴合成
        3.2.5 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)相關(guān)基因及核受體基因
        3.2.6 氣相色譜法檢測甲酯化的脂肪酸
    3.3 不同發(fā)育時期奶牛乳腺糖代謝
        3.3.1 血清葡萄糖濃度
        3.3.2 不同發(fā)育時期奶牛乳腺乳糖合成相關(guān)基因mRNA表達
        3.3.3 不同發(fā)育時期奶牛乳腺GLUT1蛋白表達
        3.3.4 不同發(fā)育時期奶牛乳腺GLUT1蛋白的表達定位
        3.3.5 HPLC方法檢測奶牛乳腺及乳中的乳糖
4 討論
    4.1 不同發(fā)育時期奶牛乳腺蛋白質(zhì)代謝
        4.1.1 不同發(fā)育時期奶牛乳腺乳蛋白基因表達
        4.1.2 PRLR、AKT1基因?qū)θ榈鞍邹D(zhuǎn)錄和翻譯相關(guān)基因表達的調(diào)控
    4.2 不同發(fā)育時期奶牛乳腺脂代謝
        4.2.1 不同發(fā)育時期奶牛乳腺脂肪酸吸收、活化和運輸
        4.2.2 不同發(fā)育時期奶牛乳腺脂肪酸的合成、去飽和
        4.2.3 不同發(fā)育時期奶牛乳腺甘油三酯和乳脂滴合成
        4.2.4 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)相關(guān)基因及核受體基因
        4.2.5 PRLR、AKT1對乳脂代謝的調(diào)節(jié)
    4.3 不同發(fā)育時期奶牛乳腺糖代謝
        4.3.1 不同發(fā)育時期奶牛乳腺GLUT1的表達與定位
        4.3.2 不同發(fā)育時期奶牛乳腺己糖激酶基因表達
        4.3.3 不同發(fā)育時期奶牛乳腺乳糖合成酶基因表達
        4.3.4 PRLR、AKT1對乳腺糖代謝的調(diào)節(jié)
5 結(jié)論
致謝
參考文獻
附錄
攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文



本文編號：3727664