旨在篩選出肝片吸蟲診斷候選抗原,拓展診斷肝片吸蟲感染引起的肝吸蟲病的靶點。通過蛋白免疫印跡試驗從肝片吸蟲成蟲噬菌體展示cDNA文庫中篩選出肝片吸蟲特異性抗原基因,對陽性克隆進行測序和生物信息學分析。克隆特異性抗原基因,并連接表達載體pET-32a（+）,構建重組質(zhì)粒,轉化至BL21（DE3）感受態(tài)細胞,通過IPTG誘導重組蛋白表達,用SDS-PAGE和Western-blot驗證其表達情況。結果表明,共計獲得了18個陽性克隆。通過候選抗原核酸序列同源性比較,發(fā)現(xiàn)肝片吸蟲假定蛋白D915₀00758具有完整的開放閱讀框。經(jīng)生物信息學分析,發(fā)現(xiàn)該蛋白cDNA全長為345 bp,編碼114個氨基酸。成功擴增出該特異性抗原基因,SDS-PAGE結果表明重組蛋白pET-Fh以包涵體形式表達,分子質(zhì)量大小約為32 ku;Western-blot證明該重組蛋白可以被肝片吸蟲陽性血清特異性識別。結果提示,假定蛋白D915₀00758可作為潛在的肝片吸蟲病診斷候選抗原,應用于肝片吸蟲感染引起的肝吸蟲病的診斷技術中。 

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【參考文獻】：
期刊論文
[1]肝片吸蟲MeCatL-B融合基因的構建、表達及其間接ELISA檢測方法的建立[J]. 王熙鳳,孟慶玲,喬軍,張凱,張國武,貢莎莎,黃運福,才學鵬.  中國預防獸醫(yī)學報. 2019(03)
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碩士論文
[1]肝片吸蟲病診斷抗原的篩選及間接ELISA方法的建立[D]. 王曉旭.黑龍江八一農(nóng)墾大學 2019
[2]三種肝片形吸蟲診斷抗原的表達及ELISA診斷方法的建立[D]. 劉明旭.東北農(nóng)業(yè)大學 2019



本文編號：3719131