發(fā)布時(shí)間：2022-12-11 16:41

　　旨在篩選出肝片吸蟲診斷候選抗原,拓展診斷肝片吸蟲感染引起的肝吸蟲病的靶點(diǎn)。通過蛋白免疫印跡試驗(yàn)從肝片吸蟲成蟲噬菌體展示cDNA文庫(kù)中篩選出肝片吸蟲特異性抗原基因,對(duì)陽性克隆進(jìn)行測(cè)序和生物信息學(xué)分析。克隆特異性抗原基因,并連接表達(dá)載體pET-32a（+）,構(gòu)建重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化至BL21（DE3）感受態(tài)細(xì)胞,通過IPTG誘導(dǎo)重組蛋白表達(dá),用SDS-PAGE和Western-blot驗(yàn)證其表達(dá)情況。結(jié)果表明,共計(jì)獲得了18個(gè)陽性克隆。通過候選抗原核酸序列同源性比較,發(fā)現(xiàn)肝片吸蟲假定蛋白D915₀00758具有完整的開放閱讀框。經(jīng)生物信息學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)該蛋白cDNA全長(zhǎng)為345 bp,編碼114個(gè)氨基酸。成功擴(kuò)增出該特異性抗原基因,SDS-PAGE結(jié)果表明重組蛋白pET-Fh以包涵體形式表達(dá),分子質(zhì)量大小約為32 ku;Western-blot證明該重組蛋白可以被肝片吸蟲陽性血清特異性識(shí)別。結(jié)果提示,假定蛋白D915₀00758可作為潛在的肝片吸蟲病診斷候選抗原,應(yīng)用于肝片吸蟲感染引起的肝吸蟲病的診斷技術(shù)中。 

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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]肝片吸蟲MeCatL-B融合基因的構(gòu)建、表達(dá)及其間接ELISA檢測(cè)方法的建立[J]. 王熙鳳,孟慶玲,喬軍,張凱,張國(guó)武,貢莎莎,黃運(yùn)福,才學(xué)鵬.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2019(03)
[2]肝片吸蟲CatB4蛋白分子特征及其免疫原性分析[J]. 王熙鳳,孟慶玲,喬軍,張凱,張國(guó)武,貢莎莎,黃運(yùn)福,才學(xué)鵬.  南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2019(01)
[3]肝片吸蟲cDNA文庫(kù)構(gòu)建及診斷候選抗原基因篩選[J]. 劉天,李新,宮鵬濤,張西臣,楊舉,李赫,李建華.  中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2019(01)
[4]肝片吸蟲CatL1D蛋白的免疫原性研究[J]. 王熙鳳,孟慶玲,喬軍,陳英,鐘文強(qiáng),貢莎莎,黃運(yùn)福,才學(xué)鵬.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2019(05)
[5]片形吸蟲分子檢測(cè)技術(shù)的研究進(jìn)展[J]. 袁曉丹,黃思揚(yáng),田艾靈,朱興全,王春仁.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2019(02)
[6]片形吸蟲排泄分泌產(chǎn)物的研究進(jìn)展[J]. 田艾靈,朱興全,黃思揚(yáng).  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2017(02)
[7]肝片吸蟲病的研究進(jìn)展[J]. 張吉麗,朱陣,李冰,周緒正,張繼瑜.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2016(11)
[8]肝片形吸蟲重組組織蛋白酶L的免疫反應(yīng)性和免疫原性分析[J]. 冉旭華,聞曉波,王春仁,李曉娟,魏曉曼.  中國(guó)寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2014(04)
[9]肝片吸蟲的特性及肝片吸蟲病的預(yù)防與治療[J]. 謝鳳云,張欽凱,王百川,潘慶杰.  畜牧與飼料科學(xué). 2014(01)
[10]旋毛蟲組織蛋白酶B基因TsCB1的克隆與生物信息學(xué)分析[J]. 謝志宙,李文卉,曲自剛,劉靜宜,高小磊,岳龍,張德林,付寶權(quán).  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2013(07)

碩士論文
[1]肝片吸蟲病診斷抗原的篩選及間接ELISA方法的建立[D]. 王曉旭.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 2019
[2]三種肝片形吸蟲診斷抗原的表達(dá)及ELISA診斷方法的建立[D]. 劉明旭.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019



本文編號(hào)：3719131