傳染性法氏囊病（Infectious bursal disease, IBD）是由傳染性法氏囊病病毒（Infectious bursal disease virus, IBDV）引起的以侵害雛雞淋巴組織尤其是中樞免疫器官—法氏囊為主要特征的一種急性、高度接觸性傳染病。該病主要侵害機體免疫器官,造成免疫抑制,致使疫苗免疫接種失敗。2004年以來,在華東地區(qū)商品代蛋雞場和肉雞場發(fā)生了多起IBD疫情,在流行病學(xué)與臨床癥狀方面表現(xiàn)為IBD疫苗免疫失敗、發(fā)病快、死亡率高。本實驗室從具有該流行病學(xué)特征的病雞法氏囊組織中分離到了兩株IBDV自然重配超強毒株,分別命名為QL和ZZ-11,并對其致病力特性、全基因組序列特征進行了研究,最后對其主要結(jié)構(gòu)蛋白基因VP2和VP3進行了克隆表達,并建立了IBDV抗體間接ELISA檢測方法。試驗內(nèi)容包括： 實驗一：傳染性法氏囊病病毒超強毒株的分離鑒定 從接種過IBDV B87疫苗的發(fā)病雞群中分離到兩株傳染性法氏囊病病毒（IBDV）,分別命名為QL和ZZ-11。用該原始病雞法氏囊懸液連續(xù)3次人工感染SPF雞后,再取其法氏囊制備懸液,-70℃保存。經(jīng)絨毛尿... 

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
目錄
摘要
ABSTRACT
縮略語表(Abbreviation)
第一篇 文獻綜述
    第一章 傳染性法氏囊病的研究進展
        1 概述
        2 病原學(xué)
            2.1 病毒分類
            2.2 基因組結(jié)構(gòu)
            2.3 病毒分離鑒定
            2.4 理化特性
            2.5 培養(yǎng)特性
        3 病原檢測方法
            3.1 瓊脂擴散試驗(AGP)
            3.2 免疫熒光試驗(IFA)
            3.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)
            3.4 中和試驗(VN)
            3.5 反轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)
            3.6 核酸探針技術(shù)(NP)
        4 防控
            4.1 基本措施
            4.2 疫苗
    參考文獻
第二篇 試驗研究
    第二章 傳染性法氏囊病病毒超強毒株的分離鑒定
        摘要
        1 材料和方法
            1.1 主要試劑和動物
            1.2 病料來源與處理
            1.3 病毒的分離
            1.4 病毒的鑒定
            1.5 病毒對SPF雞的致病性
            1.6 病毒對SPF雞胚的適應(yīng)性
            1.7 病毒對雞胚成纖維細胞(CEF)的適應(yīng)性
            1.8 VP2高變區(qū)序列分析
        2 結(jié)果
            2.1 病毒的分離鑒定
            2.2 病毒對SPF雞的致病性
            2.3 病毒對SPF雞胚適應(yīng)性
            2.4 病毒對CEF的適應(yīng)性
            2.5 VP2基因高變區(qū)的氨基酸序列
            2.6 VP2基因系統(tǒng)進化樹分析
        3 討論
        參考文獻
        Abstract
    第三章 傳染性法氏囊病病毒自然重配株全基因組序列分析
        摘要
        1 材料和方法
            1.1 主要試劑和試驗動物
            1.2 病料來源及處理
            1.3 病料純化與病毒檢測
            1.4 對雞的致病力測定
            1.5 對雞胚和雞胚成纖維細胞的適應(yīng)性試驗
            1.6 病毒全基因組序列測定分析
        2 結(jié)果
            2.1 對雞的致病力測定
            2.2 對雞胚和雞胚成纖維細胞的適應(yīng)性試驗
            2.3 病毒全基因組序列測定
            2.4 全基因組核苷酸序列遺傳演化分析
            2.5 多聚蛋白VP2-4-3和VP1的氨基酸序列遺傳演化分析
            2.6 超強毒株和弱毒株特征氨基酸與酶切位點比較
            2.7 VP2基因編碼特征氨基酸分析
        3 討論
        參考文獻
        Abstract
    第四章 傳染性法氏囊病病毒自然重配超強毒株VP2和VP3基因的克隆表達
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 主要試劑
            1.2 VP2和VP3基因的克隆
            1.3 原核表達質(zhì)粒的構(gòu)建
            1.4 原核表達質(zhì)粒的誘導(dǎo)表達
            1.5 表達產(chǎn)物的鑒定
            1.6 表達產(chǎn)物的純化
            1.7 間接ELISA檢測方法的建立
        2 結(jié)果
            2.1 VP2和VP3基因序列特性分析
            2.2 VP2基因和VP3基因原核表達質(zhì)粒的鑒定
            2.3 pET32a-VP2和pET32a-VP3的誘導(dǎo)表達
            2.4 表達產(chǎn)物的鑒定
            2.5 間接ELISA檢測方法的建立比較
        3 討論
        參考文獻
        ABSTRACT
全文總結(jié)
附錄：常用試劑的配制
致謝
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本文編號：3717485