包蟲病又稱棘球蚴病,是由細(xì)粒棘球絳蟲中絳期幼蟲寄生于人及家畜而引起的一種人獸共患寄生蟲病。該病已成為全球性的公共衛(wèi)生問題,我國(guó)是主要流行國(guó)家之一�？刂瓢x病最理想的方法是疫苗免疫接種,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)Eg95誘導(dǎo)綿羊抗六鉤蚴感染的保護(hù)率在90%以上。目的:克隆Eg95基因至pET30a質(zhì)粒,在大腸桿菌中表達(dá)Eg95蛋白;構(gòu)建并鑒定重組BCG-Eg95。方法:（1）將Eg95目的片段和質(zhì)粒pET30a分別用EcoⅠ/Hind Ⅲ及Nde Ⅰ/Hind Ⅲ限制酶消化,酶切產(chǎn)物T4DNA連接酶連接過夜;連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化E.coli.DH5α后進(jìn)行陽性克隆篩選、菌液PCR、質(zhì)粒雙酶切和測(cè)序鑒定;構(gòu)建成功的重組子轉(zhuǎn)化E.coli.BL21,IPTG誘導(dǎo)其表達(dá),表達(dá)蛋白純化;（2）將Eg95目的片段和質(zhì)粒pMV261分別用EcoR Ⅰ/Hind Ⅲ限制酶消化,酶切產(chǎn)物T4DNA連接酶連接過夜;連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化E.coli.DH5α后進(jìn)行陽性克隆篩選、菌液PCR、質(zhì)粒雙酶切和測(cè)序鑒定;用電穿孔法將重組質(zhì)粒導(dǎo)入BCG感受態(tài)細(xì)胞,重組菌進(jìn)行陽性克隆篩選、抗酸染色、PCR鑒定;重組菌熱誘導(dǎo)培養(yǎng)。結(jié)果:（1）1%瓊脂糖... 

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

}5基因PCR擴(kuò)增結(jié)果

圖２質(zhì)粒ｐＵＣ５７－ＥＧ９５酶切結(jié)果

圖３質(zhì)粒ｐＭＶ２６１及ｐＥＴ３０ａ電泳圖??注：Ｍ：?１００ｂｐ?ＤＮＡ?ｌａｄｄｅｒ；?ｌ，２，３：ｐＵＣ５７－Ｅｇ９５?注：Ｍ：?Ｗｉｄｅ?Ｒａｎｇｅ?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ（ｌ００－６０００）；??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]細(xì)粒棘球絳蟲重組Bb-Eg95-EgA31疫苗構(gòu)建及其免疫機(jī)制研究[D]. 周必英.重慶醫(yī)科大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3716372