包蟲(chóng)病又稱棘球蚴病,是由細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)中絳期幼蟲(chóng)寄生于人及家畜而引起的一種人獸共患寄生蟲(chóng)病。該病已成為全球性的公共衛(wèi)生問(wèn)題,我國(guó)是主要流行國(guó)家之一�？刂瓢x(chóng)病最理想的方法是疫苗免疫接種,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)Eg95誘導(dǎo)綿羊抗六鉤蚴感染的保護(hù)率在90%以上。目的:克隆Eg95基因至pET30a質(zhì)粒,在大腸桿菌中表達(dá)Eg95蛋白;構(gòu)建并鑒定重組BCG-Eg95。方法:（1）將Eg95目的片段和質(zhì)粒pET30a分別用EcoⅠ/Hind Ⅲ及Nde Ⅰ/Hind Ⅲ限制酶消化,酶切產(chǎn)物T4DNA連接酶連接過(guò)夜;連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化E.coli.DH5α后進(jìn)行陽(yáng)性克隆篩選、菌液PCR、質(zhì)粒雙酶切和測(cè)序鑒定;構(gòu)建成功的重組子轉(zhuǎn)化E.coli.BL21,IPTG誘導(dǎo)其表達(dá),表達(dá)蛋白純化;（2）將Eg95目的片段和質(zhì)粒pMV261分別用EcoR Ⅰ/Hind Ⅲ限制酶消化,酶切產(chǎn)物T4DNA連接酶連接過(guò)夜;連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化E.coli.DH5α后進(jìn)行陽(yáng)性克隆篩選、菌液PCR、質(zhì)粒雙酶切和測(cè)序鑒定;用電穿孔法將重組質(zhì)粒導(dǎo)入BCG感受態(tài)細(xì)胞,重組菌進(jìn)行陽(yáng)性克隆篩選、抗酸染色、PCR鑒定;重組菌熱誘導(dǎo)培養(yǎng)。結(jié)果:（1）1%瓊脂糖... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

}5基因PCR擴(kuò)增結(jié)果

圖２質(zhì)粒ｐＵＣ５７－ＥＧ９５酶切結(jié)果

圖３質(zhì)粒ｐＭＶ２６１及ｐＥＴ３０ａ電泳圖??注：Ｍ：?１００ｂｐ?ＤＮＡ?ｌａｄｄｅｒ；?ｌ，２，３：ｐＵＣ５７－Ｅｇ９５?注：Ｍ：?Ｗｉｄｅ?Ｒａｎｇｅ?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ（ｌ００－６０００）；??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)重組Bb-Eg95-EgA31疫苗構(gòu)建及其免疫機(jī)制研究[D]. 周必英.重慶醫(yī)科大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3716372