豬繁殖與呼吸綜合征于1987年最早在美國發(fā)現(xiàn),1996年我國也發(fā)現(xiàn)該病,現(xiàn)在已成為全世界流行最廣的豬病之一,給豬養(yǎng)殖業(yè)造成巨大損失,所以對該病的診斷與預防顯得尤為重要。該病的診斷方法很多,抗體檢測方法有EILSA、IFA、IPMA、 SVN,抗原檢測方法有PCR、實時熒光定量PCR。與其他方法做比較,ELISA方法更容易操作,用時短,敏感,適合用于進行流行病學調(diào)查和疫苗免疫效果的評價。 PRRSV為有囊膜的單股正鏈RNA病毒,屬于動脈炎病毒科動脈炎病毒屬的成員,基因組大小約為15kb,包括5’端非編碼區(qū)（Untranslated region. UTR）,9個開放閱讀框架（ORFla, ORFlb. ORF2a. ORF2b, ORF3-7）,和3’端UTR。其中ORF1編碼病毒依賴RNA的RNA聚合酶,ORF2a-7編碼6個膜相關蛋白（GP2a, GP2b, GP3, GP4, GP5, M）和核衣殼蛋白N。囊膜蛋白（E）又稱GP5蛋白,具有良好的抗原性和免疫原性,分子量約25kDa。研究表明GP5蛋白能刺激機體產(chǎn)生中和抗體,且中和抗體出現(xiàn)之后,抗血清主要識別E蛋白。此外,E蛋... 

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1.1 豬繁殖與呼吸綜合征簡介
    1.2 豬繁殖與呼吸綜合征研究進展
        1.2.1 豬繁殖與呼吸綜合征病毒
        1.2.2 PRRSV的抗原性
    1.3 PRRSV分子生物學研究進展
        1.3.1 PRRSV基因組結(jié)構(gòu)與功能
        1.3.2 PRRSV的蛋白質(zhì)
    1.4 PRRS診斷方法研究進展
        1.4.1 病原學診斷
        1.4.2 血清學診斷方法
        1.4.3 分子生物學診斷
    1.5 PRRS疫苗研究進展
        1.5.1 弱毒活疫苗
        1.5.2 PRRS滅活疫苗
        1.5.3 基因工程疫苗
    1.6 本研究的意義
第二章 豬繁殖與呼吸綜合征GP5基因的克隆與序列分析
    2.1 實驗材料
        2.1.1 病料
        2.1.2 克隆菌種與載體
        2.1.3 酶和試劑
        2.1.4 溶液及其配制
        2.1.5 儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 引物的設計與合成
        2.2.2 RNA的提取、反轉(zhuǎn)錄
        2.2.3 反轉(zhuǎn)錄
        2.2.4 PCR擴增目的基因
        2.2.5 PCR產(chǎn)物的回收與純化
        2.2.6 目的基因的克隆
        2.2.7 重組質(zhì)粒的提取與鑒定
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 基因擴增
        2.3.2 基因克隆
        2.3.3 重組質(zhì)粒的序列分析
    2.4 討論
第三章 豬繁殖與呼吸綜合征GP5的表達純化與活性分析
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗動物
        3.1.2 感受態(tài)細胞、原核表達載體
        3.1.3 酶和試劑
        3.1.4 儀器
        3.1.5 培養(yǎng)基
    3.2 實驗方法
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 表達用引物PCR擴增產(chǎn)物
        3.3.2 重組表達質(zhì)粒的鑒定
        3.3.3 表達產(chǎn)物的SDS—PAGE電泳
        3.3.4 表達產(chǎn)物的可溶性分析、包涵體的收集與純化
        3.3.5 純化蛋白的濃度測定
        3.3.6 WESTERN-BLOT分析
        3.3.7 免疫實驗結(jié)果
    3.4 討論
第四章 豬繁殖與呼吸綜合征抗體ELISA檢測方法的建立
    4.1 材料與方法
        4.1.1 試劑與材料
        4.1.2 儀器
        4.1.3 間接ELISA操作流程
        4.1.4 標準血清的制備
        4.1.5 間接ELISA最佳工作條件的確定
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 間接ELISA最佳工作條件的確定
    4.3 討論
第五章 豬繁殖與呼吸綜合征ELISA抗體檢測試劑盒生產(chǎn)工藝研究報告
    5.1 原料與半成品制造
        5.1.1 生產(chǎn)用種子的制備
        5.1.2 生產(chǎn)抗原的制備
        5.1.3 標準血清的制備
        5.1.4 間接ELISA最佳反應條件的確定
        5.1.5 酶標板包被
        5.1.6 試劑盒保存期實驗
        5.1.7 幾種試劑的配置
    5.2 試劑盒成品制造
        5.2.1 試劑盒包裝
        5.2.2 試劑盒組成
        5.2.3 作用和用途
        5.2.4 用法和判定
        5.2.5 貯藏
        5.2.6 規(guī)格
第六章 全文結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡歷
導師簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]豬繁殖與呼吸綜合征商品化疫苗現(xiàn)狀[J]. 張海明.  中國豬業(yè). 2012(07)
[2]豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗研究進展[J]. 吳佳俊,遇秀玲,蔣桃珍,田克恭.  中國預防獸醫(yī)學報. 2010(08)
[3]豬繁殖與呼吸綜合征病毒雙基因多組合DNA疫苗的構(gòu)建[J]. 趙永剛,薛強,周艷君,仇華吉,薩仁高娃,童光志,申之義.  中國動物檢疫. 2009(05)
[4]豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5基因?qū)ωi的DNA免疫[J]. 任慧英,郭鑫,楊漢春,王芳,趙東升,杜希珍.  中國農(nóng)業(yè)科學. 2006(08)
[5]PRRS免疫防制面臨的困惑與未來[J]. 仇華吉,童光志.  中國獸醫(yī)學報. 2000(01)
[6]從疑似PRRS流產(chǎn)胎兒分離PRRSV的研究[J]. 郭寶清,陳章水,劉文興,崔益洙.  中國畜禽傳染病. 1996(02)
[7]哈獸研所首次證實國內(nèi)豬群存在PRRSV感染[J]. 郭寶清 ,陳章水.  獸醫(yī)科技信息. 1996(01)



本文編號：3714236