旨在克隆山羊Smad3的基礎(chǔ)上,明確其組織和細(xì)胞表達(dá)譜,最終闡明干擾Smad3基因?qū)ι窖蚣?nèi)和皮下脂肪細(xì)胞分化的影響。本研究選用5只體況良好的1周齡簡州大耳羊,空腹24 h后屠宰并采集相應(yīng)組織和細(xì)胞進(jìn)行試驗。利用RT-PCR技術(shù)克隆山羊Smad3基因cDNA區(qū)序列并進(jìn)行生物信息學(xué)分析,利用實時熒光定量PCR（real-time quantitative PCR, qPCR）技術(shù)檢測Smad3基因的組織和細(xì)胞時序表達(dá)水平;并且合成靶向Smad3的siRNA,采用油紅O染色從形態(tài)學(xué)上明確干擾Smad3對山羊前體脂肪細(xì)胞成脂分化的影響,利用qPCR檢測干擾Smad3對脂肪細(xì)胞分化標(biāo)志基因C/EBPα、C/EBPβ、LPL、SREBP1、AP2、PPARγ、Pref-1、KLF3、KLF4、KLF6、KLF7、KLF8、KLF9、KLF10和KLF15以及Smads相關(guān)基因Smad2、Smad4、Smad7和TGF-β1基因mRNA表達(dá)水平的影響,探討可能的作用機(jī)制。結(jié)果,獲得山羊Smad3基因1 449 bp,其中CDS區(qū)序列為1 278 bp,編碼425個氨基酸;Smad3在山羊各組織中具... 

【文章頁數(shù)】：15 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗材料
    1.2 試驗試劑
    1.3 試驗方法
        1.3.1 Smad3基因克隆和生物信息學(xué)分析
        1.3.2 Smad3的組織和細(xì)胞時序表達(dá)
        1.3.3 干擾Smad3對山羊脂肪細(xì)胞分化的影響
            1.3.3.1 干擾效率的檢測:
            1.3.3.2 形態(tài)學(xué)檢測(油紅O染色)干擾Smad3對山羊脂肪細(xì)胞分化的影響:
            1.3.3.3 干擾Smad3對分化標(biāo)志基因及Smads和TGF-β1的影響:
        1.3.4 統(tǒng)計分析
2 結(jié) 果
    2.1 山羊Smad3基因的克隆與生物信息學(xué)分析
    2.2 山羊Smad3基因的組織和細(xì)胞表達(dá)模式
    2.3 干擾Smad3對山羊脂肪細(xì)胞分化的影響
        2.3.1 干擾效率檢測
        2.3.2 山羊肌內(nèi)和皮下脂肪細(xì)胞的形態(tài)學(xué)檢測結(jié)果
    2.4 干擾山羊Smad3對分化標(biāo)志基因表達(dá)的影響
    2.5 干擾Smad3對山羊脂肪細(xì)胞成脂分化的影響
3 討 論
    3.1 Smad3基因克隆和組織表達(dá)
    3.2 Smad3對山羊脂肪細(xì)胞分化的影響
    3.3 Smad3基因?qū)χ炯?xì)胞分化可能的作用機(jī)制
4 結(jié) 論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]轉(zhuǎn)錄因子KLF8基因結(jié)構(gòu)及其功能研究進(jìn)展[J]. 徐嘉威,賀花,張靜,雷初朝,陳宏,黃永震.  中國生物工程雜志. 2018(04)
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本文編號：3711378