J亞群ALV的分離鑒定及三種方法動(dòng)態(tài)比較分析其在DF-1細(xì)胞中的增殖
發(fā)布時(shí)間:2022-12-04 19:15
禽白血病(Avian Leukosis,AL)是由反轉(zhuǎn)錄病毒科禽白血病病毒/肉瘤病毒群病毒(ALV/RSV)引起的,以造血細(xì)胞惡性增生為主要病變的一類禽的多種良性和惡性腫瘤性傳染病。根據(jù)病毒的囊膜蛋白、與病毒宿主特異性相關(guān)的gp85蛋白抗原性的差異以及交叉中和試驗(yàn)等,將禽白血病可分為A~J10個(gè)亞群,其中只有A、B、C、D、E和J亞群能感染雞。目前,商品雞群中以致病性外源性病毒以A亞群和J亞群感染為主,二者流行性最為廣泛,且ALV-J較其它亞群的外源性ALVs有更強(qiáng)的水平傳播能力。病毒分離鑒定表明,白血病/血管瘤主要是由J亞群禽白血病病毒引起,但也同時(shí)有的是由A、B亞群白血病病毒感染引起的。這不僅僅是肉雞和蛋雞的問題,這也是我國(guó)地方品系雞(如麻雞、三黃雞等)的主要問題。由于經(jīng)典的A、B、C、D亞群白血病在我國(guó)長(zhǎng)期得不到關(guān)注且無任何凈化措施,極有可能已經(jīng)在地方品系雞中廣泛流行,甚至發(fā)生了新的變異產(chǎn)生了新的亞型。 1. SDAU12株ALV-J病毒的分離鑒定 本實(shí)驗(yàn)通過接種DF-1細(xì)胞,成功的從廣州某三黃雞種雞場(chǎng)分離到一株外源性ALVSDAU12,測(cè)得了其env基因序列,并與其他亞群的...
【文章頁(yè)數(shù)】:67 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【文章目錄】:
英文縮略詞表 中文摘要 ABSTRACT 1 前言
1.1 禽白血病病毒亞群
1.2 ALV-J 的形態(tài)學(xué)
1.3 流行病學(xué)特點(diǎn)
1.3.1 ALV-J 的宿主范圍
1.3.2 ALV-J 的傳播途徑
1.3.3 臨床癥狀
1.3.4 剖檢特點(diǎn)
1.3.5 組織病理學(xué)變化
1.3.6 ALV-J 的新流行特點(diǎn)
1.4 鑒別診斷
1.5 ALV-J 的分子生物學(xué)特性
1.6 ALV-J 的易變性
1.7 病毒的研究進(jìn)展及其危害
1.7.1 ALV-J 的研究進(jìn)展
1.7.2 實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的檢測(cè)技術(shù)
1.7.3 ALV-J 的主要危害
1.8 本研究的意義 2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
2.1 實(shí)驗(yàn)材料
2.1.1 病料來源
2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
2.1.3 DF-1 細(xì)胞
2.1.4 ALV-J 特異性單抗
2.1.5 FITC
2.1.6 ELISA 檢測(cè)試劑盒
2.1.7 培養(yǎng)基配制
2.1.8 PCR 引物
2.1.9 儀器與其他試劑
2.1.10 相關(guān)溶液的配制
2.2 試驗(yàn)方法
2.2.1 病毒的分離與增殖培養(yǎng)
2.2.2 細(xì)胞上清 p27 的檢測(cè)
2.2.3 外源性病毒的分離
2.2.4 間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)
2.2.5 前病毒基因組 cDNA 的提取
2.2.6 PCR 產(chǎn)物的克隆及測(cè)序
2.2.7 利用 ELISA、FA 及 IFA 法對(duì)新分離病毒在 DF1 細(xì)胞上的增殖進(jìn)行動(dòng)態(tài)比較分析 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.1 ALVP27 檢測(cè)結(jié)果
3.2 IFA 檢測(cè)結(jié)果
3.3 PCR 檢測(cè)結(jié)果
3.4 SDAU12 株 ENV 基因測(cè)序結(jié)果
3.5 SDAU12 株 ENV 基因氨基酸序列
3.6 SDAU12 株 ENV 基因氨基酸序列分析
3.6.1 SDAU12 毒株與其他亞群參考株 ALVgp85 氨基酸序列同源性比較分析
3.6.2 SDAU12 毒株 gp85 高變區(qū)的氨基酸變異
3.6.3 SDAU12 毒株與其他亞群參考株 ALVgp37 氨基酸序列同源性比較分析
3.7 ELISA 檢測(cè)結(jié)果
3.8 FA 檢測(cè)結(jié)果
3.9 IFA 檢測(cè)結(jié)果
3.10 三種試驗(yàn)結(jié)果的比較分析 4 討論
4.1 禽白血病病毒亞群的劃分標(biāo)準(zhǔn)
4.2 該地方品系雞中禽白血病病毒的來源
4.3 病毒的分離鑒定及序列分析
4.4 ELISA、FA 和 IFA 三種試驗(yàn)方法的比較分析
4.5 禽白血病的防控 5 結(jié)論 參考文獻(xiàn) 致謝 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況及著作
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]淋巴細(xì)胞性J亞群禽白血病病理學(xué)觀察[J]. 鄧樺,武云飛,盧玉葵,王政富,楊鴻,馬春全. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2011(12)
[2]禽白血病的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)[J]. 焦靜波,王建軍,楊建文. 畜牧與飼料科學(xué). 2009(Z2)
[3]商品蛋雞血管瘤和髓細(xì)胞瘤型J亞群禽白血病的分子診斷及病理學(xué)研究[J]. 吳曉平,錢琨,沈海玉,王平平,邵紅霞,金文杰,秦愛建. 中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào). 2009(03)
[4]J亞型禽白血病病毒分子生物學(xué)特點(diǎn)和診斷方法研究進(jìn)展[J]. 賀鋒,趙玉軍. 畜牧獸醫(yī)雜志. 2007(06)
[5]應(yīng)用PCR從AA肉種雞雞胚和1日齡雛雞體內(nèi)檢測(cè)出CIAV和ALV-J[J]. 尹遜河,孫晴,李同樹,徐淑敏,衣婷婷. 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2007(05)
[6]黃羽肉雞J亞群白血病病毒的分子生物學(xué)特性和致病性[J]. 李艷,崔治中,孫淑紅. 病毒學(xué)報(bào). 2007(03)
[7]蛋雞中發(fā)現(xiàn)J亞群白血病與網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥自然混合感染[J]. 成子強(qiáng),張玲娟,劉杰,劉思當(dāng),趙振華,張利,崔治中. 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2006(06)
[8]REV和ALV-J共感染雞病毒血癥及抗體反應(yīng)的相互影響[J]. 孟珊珊,崔治中,孫淑紅. 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2006(04)
[9]應(yīng)用組織芯片免疫組化法檢測(cè)ALV-J[J]. 張玲娟,劉杰,成子強(qiáng),王桂花,刁秀國(guó),朱國(guó). 中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2006(04)
[10]J亞群禽白血病病毒(ALV-J)ELISA檢測(cè)方法的建立[J]. 葉建強(qiáng),秦愛建,邵紅霞,金文杰,劉岳龍. 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2006(03)
博士論文
[1]熒光定量PCR檢測(cè)禽白血病病毒與RNA干擾抑制J亞群禽白血病病毒復(fù)制的研究[D]. 張?jiān)谄?內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[2]禽白血病病毒J亞群(ALV-J)內(nèi)蒙株的建立及致瘤機(jī)理的研究[D]. 成子強(qiáng).內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2002
[3]禽白血病病毒J亞群囊膜糖蛋白基因的生物學(xué)和生物化學(xué)特性[D]. 秦愛建.揚(yáng)州大學(xué) 1999
碩士論文
[1]雞混合感染J亞群白血病病毒與網(wǎng)狀內(nèi)皮增殖病病毒免疫抑制機(jī)理研究[D]. 商營(yíng)利.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2003
本文編號(hào):3708837
【文章頁(yè)數(shù)】:67 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【文章目錄】:
英文縮略詞表 中文摘要 ABSTRACT 1 前言
1.1 禽白血病病毒亞群
1.2 ALV-J 的形態(tài)學(xué)
1.3 流行病學(xué)特點(diǎn)
1.3.1 ALV-J 的宿主范圍
1.3.2 ALV-J 的傳播途徑
1.3.3 臨床癥狀
1.3.4 剖檢特點(diǎn)
1.3.5 組織病理學(xué)變化
1.3.6 ALV-J 的新流行特點(diǎn)
1.4 鑒別診斷
1.5 ALV-J 的分子生物學(xué)特性
1.6 ALV-J 的易變性
1.7 病毒的研究進(jìn)展及其危害
1.7.1 ALV-J 的研究進(jìn)展
1.7.2 實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的檢測(cè)技術(shù)
1.7.3 ALV-J 的主要危害
1.8 本研究的意義 2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
2.1 實(shí)驗(yàn)材料
2.1.1 病料來源
2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
2.1.3 DF-1 細(xì)胞
2.1.4 ALV-J 特異性單抗
2.1.5 FITC
2.1.6 ELISA 檢測(cè)試劑盒
2.1.7 培養(yǎng)基配制
2.1.8 PCR 引物
2.1.9 儀器與其他試劑
2.1.10 相關(guān)溶液的配制
2.2 試驗(yàn)方法
2.2.1 病毒的分離與增殖培養(yǎng)
2.2.2 細(xì)胞上清 p27 的檢測(cè)
2.2.3 外源性病毒的分離
2.2.4 間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)
2.2.5 前病毒基因組 cDNA 的提取
2.2.6 PCR 產(chǎn)物的克隆及測(cè)序
2.2.7 利用 ELISA、FA 及 IFA 法對(duì)新分離病毒在 DF1 細(xì)胞上的增殖進(jìn)行動(dòng)態(tài)比較分析 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.1 ALVP27 檢測(cè)結(jié)果
3.2 IFA 檢測(cè)結(jié)果
3.3 PCR 檢測(cè)結(jié)果
3.4 SDAU12 株 ENV 基因測(cè)序結(jié)果
3.5 SDAU12 株 ENV 基因氨基酸序列
3.6 SDAU12 株 ENV 基因氨基酸序列分析
3.6.1 SDAU12 毒株與其他亞群參考株 ALVgp85 氨基酸序列同源性比較分析
3.6.2 SDAU12 毒株 gp85 高變區(qū)的氨基酸變異
3.6.3 SDAU12 毒株與其他亞群參考株 ALVgp37 氨基酸序列同源性比較分析
3.7 ELISA 檢測(cè)結(jié)果
3.8 FA 檢測(cè)結(jié)果
3.9 IFA 檢測(cè)結(jié)果
3.10 三種試驗(yàn)結(jié)果的比較分析 4 討論
4.1 禽白血病病毒亞群的劃分標(biāo)準(zhǔn)
4.2 該地方品系雞中禽白血病病毒的來源
4.3 病毒的分離鑒定及序列分析
4.4 ELISA、FA 和 IFA 三種試驗(yàn)方法的比較分析
4.5 禽白血病的防控 5 結(jié)論 參考文獻(xiàn) 致謝 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況及著作
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]淋巴細(xì)胞性J亞群禽白血病病理學(xué)觀察[J]. 鄧樺,武云飛,盧玉葵,王政富,楊鴻,馬春全. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2011(12)
[2]禽白血病的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)[J]. 焦靜波,王建軍,楊建文. 畜牧與飼料科學(xué). 2009(Z2)
[3]商品蛋雞血管瘤和髓細(xì)胞瘤型J亞群禽白血病的分子診斷及病理學(xué)研究[J]. 吳曉平,錢琨,沈海玉,王平平,邵紅霞,金文杰,秦愛建. 中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào). 2009(03)
[4]J亞型禽白血病病毒分子生物學(xué)特點(diǎn)和診斷方法研究進(jìn)展[J]. 賀鋒,趙玉軍. 畜牧獸醫(yī)雜志. 2007(06)
[5]應(yīng)用PCR從AA肉種雞雞胚和1日齡雛雞體內(nèi)檢測(cè)出CIAV和ALV-J[J]. 尹遜河,孫晴,李同樹,徐淑敏,衣婷婷. 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2007(05)
[6]黃羽肉雞J亞群白血病病毒的分子生物學(xué)特性和致病性[J]. 李艷,崔治中,孫淑紅. 病毒學(xué)報(bào). 2007(03)
[7]蛋雞中發(fā)現(xiàn)J亞群白血病與網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥自然混合感染[J]. 成子強(qiáng),張玲娟,劉杰,劉思當(dāng),趙振華,張利,崔治中. 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2006(06)
[8]REV和ALV-J共感染雞病毒血癥及抗體反應(yīng)的相互影響[J]. 孟珊珊,崔治中,孫淑紅. 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2006(04)
[9]應(yīng)用組織芯片免疫組化法檢測(cè)ALV-J[J]. 張玲娟,劉杰,成子強(qiáng),王桂花,刁秀國(guó),朱國(guó). 中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2006(04)
[10]J亞群禽白血病病毒(ALV-J)ELISA檢測(cè)方法的建立[J]. 葉建強(qiáng),秦愛建,邵紅霞,金文杰,劉岳龍. 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2006(03)
博士論文
[1]熒光定量PCR檢測(cè)禽白血病病毒與RNA干擾抑制J亞群禽白血病病毒復(fù)制的研究[D]. 張?jiān)谄?內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[2]禽白血病病毒J亞群(ALV-J)內(nèi)蒙株的建立及致瘤機(jī)理的研究[D]. 成子強(qiáng).內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2002
[3]禽白血病病毒J亞群囊膜糖蛋白基因的生物學(xué)和生物化學(xué)特性[D]. 秦愛建.揚(yáng)州大學(xué) 1999
碩士論文
[1]雞混合感染J亞群白血病病毒與網(wǎng)狀內(nèi)皮增殖病病毒免疫抑制機(jī)理研究[D]. 商營(yíng)利.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2003
本文編號(hào):3708837
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