旨在通過(guò)RNA干擾技術(shù)揭示蛋白酪氨酸磷酸酶（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10,PTEN）基因在奶山羊乳腺上皮細(xì)胞中對(duì)乳脂合成及脂肪酸組成的影響。利用RT-PCR方法擴(kuò)增到西農(nóng)薩能奶山羊乳腺組織中PTEN基因（GenBank登錄號(hào):MK158074.1）的CDS區(qū),進(jìn)行序列分析和不同泌乳時(shí)期差異轉(zhuǎn)錄分析。合成靶向該基因的siRNA,由RT-qPCR結(jié)果篩選出有效siRNA,將其轉(zhuǎn)染至奶山羊的乳腺上皮細(xì)胞,進(jìn)一步檢測(cè)干擾該基因后對(duì)脂質(zhì)合成相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平及脂肪酸組成的影響。結(jié)果表明:本研究首次克隆到奶山羊（Capra hircus）PTEN基因的CDS區(qū),全長(zhǎng)為1 212 bp;經(jīng)序列比對(duì)發(fā)現(xiàn),山羊的PTEN基因核苷酸序列同牛（Bos taurus）、豬（Sus scrofa）和人（Homo sapiens）的相似度分別為99%、98%和97%,編碼氨基酸序列相似性均在99%以上;蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn):其蛋白不存在跨膜結(jié)構(gòu)域,亞細(xì)胞定位于細(xì)胞質(zhì)中,N端具有保守的磷酸酶功能區(qū);該基因在奶山羊泌乳盛期乳腺組織中的轉(zhuǎn)錄量... 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 樣品采集
        1.1.2 主要試劑
    1.2 方法
        1.2.1 PTEN基因CDS區(qū)的克隆
        1.2.2 PTEN基因生物信息學(xué)分析
        1.2.3 不同泌乳時(shí)期PTEN基因差異轉(zhuǎn)錄分析
        1.2.4 siRNA的設(shè)計(jì)與合成
        1.2.5 細(xì)胞的培養(yǎng)與siRNA的轉(zhuǎn)染
        1.2.6 PTEN基因的干擾效果檢測(cè)及有效siRNA的篩選
        1.2.7 RT-qPCR檢測(cè)干擾PTEN基因?qū)θ橄僦x關(guān)鍵基因的影響
        1.2.8 脂肪酸的提取與檢測(cè)
2 結(jié) 果
    2.1 奶山羊PTEN基因CDS區(qū)的克隆
    2.2 奶山羊PTEN基因生物信息學(xué)分析
    2.3 不同泌乳時(shí)期奶山羊乳腺組織PTEN基因的差異轉(zhuǎn)錄分析
    2.4 有效siRNA序列的篩選及干擾效率檢測(cè)
    2.5 干擾PTEN基因?qū)χx關(guān)鍵基因的RT-qPCR檢測(cè)影響
    2.6 干擾PTEN基因?qū)χ舅峤M成的影響
3 討 論
4 結(jié) 論



本文編號(hào)：3707756