為了進一步揭示戊型肝炎病毒（HEV）與腸道黏膜免疫屏障的相互作用,本研究應(yīng)用新西蘭大白兔及長爪沙鼠作為HEV的感染的動物模型,目標(biāo)鎖定HEV相關(guān)抗原在腸道組織中的定位及其對腸道黏膜免疫的影響,采用組織病理學(xué)、組織細(xì)胞化學(xué)、免疫組織化學(xué)、PCR等方法,全面系統(tǒng)地觀察兔及沙鼠感染HEV后,腸道結(jié)構(gòu),腸道黏膜免疫相關(guān)細(xì)胞的數(shù)量及黏膜免疫相關(guān)因子表達(dá),揭示了HEV侵入過程中腸道免疫細(xì)胞間及局部黏膜免疫功能之間的關(guān)系,進而闡明黏膜免疫相關(guān)細(xì)胞和分子在HEV感染中的功能作用。試驗結(jié)果如下： 1、兔源HEV感染家兔試驗兔源HEV腹腔感染兔后,呈現(xiàn)不同的感染類型,感染后血清、糞便均可檢測到]HEV RNA,血清中可檢測到HEV ORF2抗原,同時肝臟也表現(xiàn)出與人HEV感染相似的病理變化；HEV感染兔全身組織器官HEV RNA及ORF2抗原檢測結(jié)果顯示,兔源HEV RNA及ORF2抗原可在感染兔不同組織器官（肝臟、脾臟、肺臟、淋巴結(jié)、十二指腸、空腸、回腸、圓小囊、蚓突）中分布,并且當(dāng)糞便內(nèi)存在HEV RNA時,腸道及腸相關(guān)淋巴組織可呈HEV抗原陽性；免疫組織化學(xué)觀察結(jié)果表明：HEV ORF2抗原... 

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【學(xué)位級別】：博士

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摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    一 分子病毒學(xué)
        1 分類學(xué)
        2 分子形態(tài)學(xué)及理化特征
        3 基因組
        4 病毒蛋白
        5 病毒的復(fù)制周期
    二 流行病學(xué)
        1 HEV的分布
            1.1 HEV的地理分布
            1.2 HEV的基因型分布
        2 動物宿主及種間流行
            2.1 豬的HEV流行
            2.2 兔的HEV流行
            2.3 其它動物HEV的流行
        3 HEV的傳播途徑
            3.1 糞口途徑傳播
            3.2 血液傳播
            3.3 直接接觸感染動物傳播
    三 HEV的臨床癥狀及病理變化
    四 HEV的動物模型
        1 非人靈長類動物模型
        2 豬動物模型
        3 鼠動物模型
        4 兔動物模型
    五 HEV感染的靶器官
    六 腸道黏膜免疫
        1 腸道的結(jié)構(gòu)
            1.1 腸道組織結(jié)構(gòu)特點
            1.2 腸道絨毛長度
            1.3 腸道隱窩深度
            1.4 腸道上皮細(xì)胞
        2 腸道的屏障功能
            2.1 腸道物理屏障
            2.2 腸道的黏膜免疫屏障
            2.3 腸薪膜生態(tài)屏障
        3 腸道黏膜免疫與病毒
        4 HEV及與腸道的關(guān)系
    七 本研究的目的與意義
第二章 兔源HEV RNA及抗原在兔全身組織器官的分布與定位
    前言
    試驗一 兔源HEV灌胃及腹腔攻毒的比較
        1. 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 標(biāo)準(zhǔn)品的制備與鑒定
            2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
            2.3 病毒懸液中的HEV載量的測定
            2.4 攻毒后兔糞便中HEV RNA的檢測結(jié)果
            2.5 攻毒后兔肝臟中HEV RNA的檢測結(jié)果
        3 討論
    試驗二 兔源HEV腹腔注射攻毒動物模型的探討
        1. 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 臨床觀察結(jié)果
            2.2 攻毒后兔血清及糞便中HEV-RNA的檢測結(jié)果
            2.3 攻毒后兔血清中抗原及抗體的檢測
            2.4 肝臟組織學(xué)觀察
        3 討論
    試驗三 兔源HEV RNA及抗原在兔全身組織器官中的分布與定位
        1. 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2. 結(jié)果
            2.1 試驗兔組織與器官中HEV RNA的檢測
            2.2 試驗兔組織與器官中ORF2抗原的檢測
        3. 討論
    試驗四 HEV ORF2及ORF3抗原在感染兔腸道中的定位
        1. 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2. 結(jié)果
            2.1 HEV ORF2抗原在腸道及腸相關(guān)淋巴組織的定位
            2.2 HEV ORF3抗原在腸道及腸相關(guān)淋巴組織的定位
        3. 討論
    小結(jié)
第三章 豬源HEV人工感染對沙鼠腸道黏膜免疫的影響
    前言
    試驗一 沙鼠腸道中HEV RNA及抗原的分布與定位
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 臨床觀察結(jié)果
            2.2 沙鼠糞便中HEV RNA的檢測
            2.3 沙鼠腸道中HEV RNA的檢測
            2.4 沙鼠腸道中HEV ORF2抗原的分布
        3 討論
    試驗二 豬源HEV感染對沙鼠腸道形態(tài)及結(jié)構(gòu)的影響
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 HEV感染對沙鼠腸道結(jié)構(gòu)的影響
            2.2 HEV感染對沙鼠各段腸道絨毛長度的影響
            2.3 HEV感染對沙鼠各段腸道隱窩深度的影響
            2.4 HEV感染對沙鼠腸道杯狀細(xì)胞的影響
            2.5 HEV感染對沙鼠腸道基底膜的影響
        3 討論
    試驗三 豬源HEV感染對沙鼠黏膜免疫相關(guān)功能的影響
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 HEV感染對腸道派爾氏結(jié)數(shù)量的影響
            2.2 HEV感染對沙鼠腸道上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量的影響
            2.3 HEV感染對沙鼠腸道SIgA的影響
            2.4 HEV感染對沙鼠腸道肥大細(xì)胞數(shù)量的影響
            2.5 HEV感染對沙鼠腸絨毛樹突狀細(xì)胞的影響
        3 討論
    小結(jié)
第四章 兔戊型肝炎病毒(HEV)活體腸袢結(jié)扎感染試驗
    前言
    試驗一 兔活體腸袢結(jié)扎HEV感染試驗
        1. 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 兔活體腸袢結(jié)扎及攻毒試驗
            1.3 樣品收集
            1.4 ELISA檢測血清中抗原
            1.5 免疫組織化學(xué)檢測組織中ORF2抗原
            1.6 活體結(jié)扎兔圓小囊淋巴細(xì)胞增殖活性測定
        2 結(jié)果
            2.1 活體結(jié)扎腸系膜靜脈血清抗原檢測
            2.2 活體結(jié)扎回腸組織HEV ORF2免疫組織化學(xué)染色結(jié)果
            2.3 活體結(jié)扎圓小囊組織HEV ORF2免疫組織化學(xué)染色結(jié)果
            2.4 HEV對活體結(jié)扎兔圓小囊內(nèi)T淋巴細(xì)胞增殖的影響
        3 討論
    試驗二 IgA與HEV相互作用初探
        1. 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 攻毒
            1.3 樣品收集
            1.5 免疫組織化學(xué)檢測回腸及圓小囊中ORF2抗原
        2 結(jié)果
            2.1 回腸HEV ORF2免疫組織化學(xué)染色
            2.2 圓小囊HEV ORF2免疫組織化學(xué)染色
        3 討論
    小結(jié)
結(jié)論
本研究的創(chuàng)新點
參考文獻(xiàn)
圖版與說明
致謝
作者簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3701969