發(fā)布時間：2022-10-30 09:47

　　泰勒蟲是一種經由蜱傳播的一類血液寄生原蟲,它的爆發(fā)會給全球畜牧業(yè)造成了嚴重的經濟損失。在泰勒蟲的流行病學調查、分類、以及致病性研究等方面,相關報道較多,而在其基因組,轉錄組,蛋白組等方面的文獻報道極少。本研究選取了6株致病力較強的羊泰勒蟲種株作為研究對象進行蛋白質組學分析,通過iTRAQ技術測定了呂氏泰勒蟲及尤氏泰勒蟲種內及種間的差異表達蛋白,并針對一些重要的功能性蛋白進行了初步分析及轉錄水平的驗證,分別提交并公布了呂氏泰勒蟲及尤氏泰勒蟲的全蛋白質組學數(shù)據庫,并針對一些與泰勒蟲能量代謝相關的蛋白進行了討論。為此我們進行了以下研究工作： 1、對呂氏泰勒蟲與尤氏泰勒蟲兩個種的六個地方株進行了裂殖子的培養(yǎng)；隨后利用所建立的免疫親和層析柱的純化方法對蟲體進行提純,盡可能除去紅細胞碎片及其他雜質,從而得到較為純凈的蛋白質組學研究材料。隨后,建立了一種能夠同時鑒定三種羊泰勒蟲的多重PCR方法,對所培養(yǎng)的蟲種進行了快速的鑒定與分類。 2、利用iTRAQ技術對兩種羊泰勒蟲的差異表達蛋白進行了分析,超過670個蛋白被鑒定出,將這些蛋白按照功能進行分類,其中與細胞進程相關蛋白有29.78%,與... 

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 病原特征
    1.2 臨床及病理變化
    1.3 泰勒蟲裂殖子的檢測
    1.4 泰勒蟲裂殖子的純化
    1.5 蛋白質鑒定
    1.6 蛋白全譜分析
    1.7 差異蛋白分析
    1.8 蛋白質組學在寄生蟲方面的應用
第二章 呂氏泰勒蟲和尤氏泰勒蟲的鑒定、增殖與純化
    2.1 材料
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 蟲種資源
        2.1.4 實驗動物
    2.2 方法
        2.2.1 泰勒蟲的增殖
        2.2.2 多重PCR鑒定方法的建立
            2.2.2.1 引物設計
            2.2.2.2 多重PCR特異性及靈敏性檢測
            2.2.2.3 多重PCR反應條件優(yōu)化
            2.2.2.4 PCR產物檢測
        2.2.3 免疫親和層析純化泰勒蟲裂殖子方法的建立
            2.2.3.1 抗體的純化
            2.2.3.2 抗體的上樣前處理
            2.2.3.3 抗體的偶聯(lián)
            2.2.3.4 樣品預處理
            2.2.3.5 裂殖子的純化
            2.2.3.6 純化效果檢測
    2.3 結果
        2.3.1 蟲體的增殖
        2.3.2 多重PCR特異性檢測
        2.3.3 多重PCR靈敏性檢測
        2.3.4 反應條件的優(yōu)化
        2.3.5 野外樣品檢測
        2.3.6 抗體純化效果
        2.3.7 蟲體純化效果
    2.4 討論
第三章 呂氏泰勒蟲與尤氏泰勒蟲裂殖子的差異蛋白組學鑒定與功能分析
    3.1 材料
        3.1.1 主要儀器
        3.1.2 主要試劑
    3.2 方法
        3.2.1 蟲體蛋白質提取
        3.2.2 Bradford定量
        3.2.3 蛋白電泳
        3.2.4 樣品的酶解
        3.2.5 iTRAQ標記
        3.2.6 SCX分離
        3.2.7 基于Triple TOF 5600的LC-ESI-MSMS分析
        3.2.8 Mascot搜索
        3.2.9 GO注釋
        3.2.10 COG注釋
        3.2.11 Pathway代謝通路注釋
    3.3 結果
        3.3.1 泰勒蟲蛋白提取
        3.3.2 Bradford標準曲線制作
        3.3.3 泰勒蟲蛋白質鑒定
            3.3.3.1 數(shù)據庫選擇
            3.3.3.2 Mascot搜索
            3.3.3.3 蛋白鑒定基本信息
        3.3.4 氏泰勒蟲種內差異蛋白分析
            3.3.4.1 氏泰勒蟲種內差異蛋白分布
            3.3.4.2 呂氏泰勒蟲種內差異蛋白的功能聚類
        3.3.5 尤氏氏泰勒蟲種內差異蛋白分析
            3.3.5.1 尤氏泰勒蟲種內差異蛋白分布
            3.3.5.2 尤氏泰勒蟲種內差異蛋白的功能聚類
        3.3.6 兩種泰勒蟲種間蛋白差異性分析
        3.3.7 差異蛋白的功能聚類
        3.3.8 細胞通路分析
        3.3.9 在轉錄水平對重點差異蛋白表達量驗證
    3.4 討論
第四章 呂氏泰勒蟲與尤氏泰勒蟲裂殖子的蛋白全譜分析
    4.1 材料
        4.1.1 主要儀器
        4.1.2 主要試劑
    4.2 方法
        4.2.1 蟲體蛋白質提取
        4.2.2 Bradford定量
        4.2.3 SDS電泳
        4.2.4 蛋白質膠內酶解
        4.2.5 肽段提取
        4.2.6 基于LTQ-Orbitrap CID的LC-ESI-MS/MS分析
        4.2.7 Mascot搜索
    4.3 結果
        4.3.1 泰勒蟲蛋白提取
        4.3.2 Bradford標準曲線制作
        4.3.3 蛋白鑒定結果
            4.3.3.1 肽段匹配誤差分析
            4.3.3.2 蛋白鑒定覆蓋度分布
            4.3.3.3 鑒定肽段序列長度分布
        4.3.4 GO分析
            4.3.4.1 呂氏泰勒蟲GO分析
            4.3.4.2 尤氏泰勒蟲GO分析
        4.3.5 GOG分析
            4.3.5.1 呂氏泰勒蟲GOG分析
            4.3.5.2 尤氏泰勒蟲GOG分析
    4.4 討論
全文結論
參考文獻
致謝
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]急性脊髓損傷后差異蛋白的表達[J]. 徐磊磊,周義軍,宋興華,丁俐文,陳江濤,王翀,甘雨靈,朱曉萌.  中國組織工程研究. 2013(41)
[2]纖維素濾膜過濾法純化弓形蟲速殖子并制備可溶性抗原[J]. 方正明,王升,蘇斌濤,宮念樵,劉文琪,明長生.  中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志. 2010(05)

博士論文
[1]東方蜜蜂抗螨相關基因的篩選及初步驗證[D]. 殷玲.揚州大學 2013
[2]柞蠶微孢子蟲檢測及感染柞蠶中腸轉錄組及蛋白質組學研究[D]. 姜義仁.沈陽農業(yè)大學 2012



本文編號：3698661