泰勒蟲是一種經(jīng)由蜱傳播的一類血液寄生原蟲,它的爆發(fā)會(huì)給全球畜牧業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。在泰勒蟲的流行病學(xué)調(diào)查、分類、以及致病性研究等方面,相關(guān)報(bào)道較多,而在其基因組,轉(zhuǎn)錄組,蛋白組等方面的文獻(xiàn)報(bào)道極少。本研究選取了6株致病力較強(qiáng)的羊泰勒蟲種株作為研究對(duì)象進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析,通過(guò)iTRAQ技術(shù)測(cè)定了呂氏泰勒蟲及尤氏泰勒蟲種內(nèi)及種間的差異表達(dá)蛋白,并針對(duì)一些重要的功能性蛋白進(jìn)行了初步分析及轉(zhuǎn)錄水平的驗(yàn)證,分別提交并公布了呂氏泰勒蟲及尤氏泰勒蟲的全蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù),并針對(duì)一些與泰勒蟲能量代謝相關(guān)的蛋白進(jìn)行了討論。為此我們進(jìn)行了以下研究工作： 1、對(duì)呂氏泰勒蟲與尤氏泰勒蟲兩個(gè)種的六個(gè)地方株進(jìn)行了裂殖子的培養(yǎng)；隨后利用所建立的免疫親和層析柱的純化方法對(duì)蟲體進(jìn)行提純,盡可能除去紅細(xì)胞碎片及其他雜質(zhì),從而得到較為純凈的蛋白質(zhì)組學(xué)研究材料。隨后,建立了一種能夠同時(shí)鑒定三種羊泰勒蟲的多重PCR方法,對(duì)所培養(yǎng)的蟲種進(jìn)行了快速的鑒定與分類。 2、利用iTRAQ技術(shù)對(duì)兩種羊泰勒蟲的差異表達(dá)蛋白進(jìn)行了分析,超過(guò)670個(gè)蛋白被鑒定出,將這些蛋白按照功能進(jìn)行分類,其中與細(xì)胞進(jìn)程相關(guān)蛋白有29.78%,與... 

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 病原特征
    1.2 臨床及病理變化
    1.3 泰勒蟲裂殖子的檢測(cè)
    1.4 泰勒蟲裂殖子的純化
    1.5 蛋白質(zhì)鑒定
    1.6 蛋白全譜分析
    1.7 差異蛋白分析
    1.8 蛋白質(zhì)組學(xué)在寄生蟲方面的應(yīng)用
第二章 呂氏泰勒蟲和尤氏泰勒蟲的鑒定、增殖與純化
    2.1 材料
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 蟲種資源
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.2 方法
        2.2.1 泰勒蟲的增殖
        2.2.2 多重PCR鑒定方法的建立
            2.2.2.1 引物設(shè)計(jì)
            2.2.2.2 多重PCR特異性及靈敏性檢測(cè)
            2.2.2.3 多重PCR反應(yīng)條件優(yōu)化
            2.2.2.4 PCR產(chǎn)物檢測(cè)
        2.2.3 免疫親和層析純化泰勒蟲裂殖子方法的建立
            2.2.3.1 抗體的純化
            2.2.3.2 抗體的上樣前處理
            2.2.3.3 抗體的偶聯(lián)
            2.2.3.4 樣品預(yù)處理
            2.2.3.5 裂殖子的純化
            2.2.3.6 純化效果檢測(cè)
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 蟲體的增殖
        2.3.2 多重PCR特異性檢測(cè)
        2.3.3 多重PCR靈敏性檢測(cè)
        2.3.4 反應(yīng)條件的優(yōu)化
        2.3.5 野外樣品檢測(cè)
        2.3.6 抗體純化效果
        2.3.7 蟲體純化效果
    2.4 討論
第三章 呂氏泰勒蟲與尤氏泰勒蟲裂殖子的差異蛋白組學(xué)鑒定與功能分析
    3.1 材料
        3.1.1 主要儀器
        3.1.2 主要試劑
    3.2 方法
        3.2.1 蟲體蛋白質(zhì)提取
        3.2.2 Bradford定量
        3.2.3 蛋白電泳
        3.2.4 樣品的酶解
        3.2.5 iTRAQ標(biāo)記
        3.2.6 SCX分離
        3.2.7 基于Triple TOF 5600的LC-ESI-MSMS分析
        3.2.8 Mascot搜索
        3.2.9 GO注釋
        3.2.10 COG注釋
        3.2.11 Pathway代謝通路注釋
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 泰勒蟲蛋白提取
        3.3.2 Bradford標(biāo)準(zhǔn)曲線制作
        3.3.3 泰勒蟲蛋白質(zhì)鑒定
            3.3.3.1 數(shù)據(jù)庫(kù)選擇
            3.3.3.2 Mascot搜索
            3.3.3.3 蛋白鑒定基本信息
        3.3.4 氏泰勒蟲種內(nèi)差異蛋白分析
            3.3.4.1 氏泰勒蟲種內(nèi)差異蛋白分布
            3.3.4.2 呂氏泰勒蟲種內(nèi)差異蛋白的功能聚類
        3.3.5 尤氏氏泰勒蟲種內(nèi)差異蛋白分析
            3.3.5.1 尤氏泰勒蟲種內(nèi)差異蛋白分布
            3.3.5.2 尤氏泰勒蟲種內(nèi)差異蛋白的功能聚類
        3.3.6 兩種泰勒蟲種間蛋白差異性分析
        3.3.7 差異蛋白的功能聚類
        3.3.8 細(xì)胞通路分析
        3.3.9 在轉(zhuǎn)錄水平對(duì)重點(diǎn)差異蛋白表達(dá)量驗(yàn)證
    3.4 討論
第四章 呂氏泰勒蟲與尤氏泰勒蟲裂殖子的蛋白全譜分析
    4.1 材料
        4.1.1 主要儀器
        4.1.2 主要試劑
    4.2 方法
        4.2.1 蟲體蛋白質(zhì)提取
        4.2.2 Bradford定量
        4.2.3 SDS電泳
        4.2.4 蛋白質(zhì)膠內(nèi)酶解
        4.2.5 肽段提取
        4.2.6 基于LTQ-Orbitrap CID的LC-ESI-MS/MS分析
        4.2.7 Mascot搜索
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 泰勒蟲蛋白提取
        4.3.2 Bradford標(biāo)準(zhǔn)曲線制作
        4.3.3 蛋白鑒定結(jié)果
            4.3.3.1 肽段匹配誤差分析
            4.3.3.2 蛋白鑒定覆蓋度分布
            4.3.3.3 鑒定肽段序列長(zhǎng)度分布
        4.3.4 GO分析
            4.3.4.1 呂氏泰勒蟲GO分析
            4.3.4.2 尤氏泰勒蟲GO分析
        4.3.5 GOG分析
            4.3.5.1 呂氏泰勒蟲GOG分析
            4.3.5.2 尤氏泰勒蟲GOG分析
    4.4 討論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]急性脊髓損傷后差異蛋白的表達(dá)[J]. 徐磊磊,周義軍,宋興華,丁俐文,陳江濤,王翀,甘雨靈,朱曉萌.  中國(guó)組織工程研究. 2013(41)
[2]纖維素濾膜過(guò)濾法純化弓形蟲速殖子并制備可溶性抗原[J]. 方正明,王升,蘇斌濤,宮念樵,劉文琪,明長(zhǎng)生.  中國(guó)寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2010(05)

博士論文
[1]東方蜜蜂抗螨相關(guān)基因的篩選及初步驗(yàn)證[D]. 殷玲.揚(yáng)州大學(xué) 2013
[2]柞蠶微孢子蟲檢測(cè)及感染柞蠶中腸轉(zhuǎn)錄組及蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D]. 姜義仁.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3698661