豬傳染性胃腸炎（Porcine transmissible gastroenteritis,TGE）是豬的一種急性、高度接觸性腸道傳染病。該病由豬傳染性胃腸炎病毒（TGE virus,TGEV）引起,以嚴(yán)重的嘔吐、腹瀉及2周內(nèi)仔豬高死亡率為特征。TGE與豬流行性腹瀉病毒（PEDV）、豬Delta冠狀病毒及豬輪狀病毒等引起的臨床癥狀相似,臨床鑒別診斷困難。膠體金免疫層析試紙具備適合獸醫(yī)臨床快速診斷,特異性高、操作簡(jiǎn)單等特點(diǎn)。已知TGEV N蛋白是TGEV抗原和抗體檢測(cè)方法研究的重要靶蛋白。因此,本研究以N蛋白為靶蛋白,制備單克隆抗體,研制快速檢測(cè)TGEV抗原的膠體金免疫層析試紙,旨在為TGE的快速診斷與防治提供重要技術(shù)支撐。本研究以弗氏佐劑乳化的重組TGEV N蛋白免疫3只雌性BALB/c小鼠,共免疫3次,間隔2周。第3次免疫后10天,經(jīng)ELISA檢測(cè)3只小鼠的血清特異性抗體效價(jià)在1:10240~1:20480之間,選取抗體效價(jià)為1:20480的小鼠于融合前用N蛋白進(jìn)行腹腔沖擊免疫。沖擊免疫后第3天取小鼠脾細(xì)胞與雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合,通過(guò)ELISA篩選分泌TGEV N蛋白特異性抗體的陽(yáng)... 

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略詞表
1 引言
    1.1 豬傳染性胃腸炎概述
        1.1.1 流行特點(diǎn)
        1.1.2 臨床癥狀與病理變化
    1.2 豬傳染性胃腸炎病毒
        1.2.1 基本生物學(xué)特征
        1.2.2 分子生物學(xué)特征
    1.3 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)
        1.3.1 病毒的分離鑒定
        1.3.2 免疫熒光技術(shù)
        1.3.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
        1.3.4 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
    1.4 疫苗
        1.4.1 滅活疫苗
        1.4.2 弱毒活疫苗
        1.4.3 基因工程疫苗
    1.5 防治
    1.6 膠體金免疫層析技術(shù)
        1.6.1 膠體金的特性及制備
        1.6.2 免疫膠體金的制備
        1.6.3 膠體金免疫層析技術(shù)的應(yīng)用
    1.7 研究的目的及意義
    1.8 研究?jī)?nèi)容與技術(shù)路線
        1.8.1 研究?jī)?nèi)容
        1.8.2 技術(shù)路線
    1.9 研究的目標(biāo)
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 單克隆抗體制備用材料
        2.1.2 膠體金免疫層析試驗(yàn)方法建立用材料
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
    2.2 方法
        2.2.1 TGEV單克隆抗體的制備
        2.2.2 兔抗TGEV N蛋白多抗血清的制備與純化鑒定
        2.2.3 TGEV抗原檢測(cè)膠體金試紙條的制備
3 結(jié)果
    3.1 純化的TGEV N蛋白
    3.2 TGEV及其TCID50
    3.3 TGEV抗體檢測(cè)間接ELISA方法
    3.4 融合前小鼠抗TGEV N蛋白血清抗體效價(jià)
    3.5 細(xì)胞融合與獲得的雜交瘤細(xì)胞株
    3.6 單克隆抗體的類型
    3.7 單克隆抗體的抗原識(shí)別表位
    3.8 單克隆抗體的免疫活性
    3.9 單抗2F5 能夠與TGEV特異性結(jié)合
    3.10 單克隆抗體的效價(jià)
    3.11 純化腹水的SDS-PAGE
    3.12 兔抗TGEV N蛋白多抗血清的效價(jià)
    3.13 兔抗N蛋白多克隆抗體的免疫活性
    3.14 膠體金標(biāo)記多抗的最適pH值
    3.15 膠體金標(biāo)記TGEV多抗的最適濃度
    3.16 檢測(cè)線與質(zhì)控線的工作濃度
    3.17 試紙條的特異性鑒定
    3.18 試紙條的敏感性檢測(cè)
    3.19 臨床應(yīng)用
4 討論
    4.1 重組TGEV N蛋白免疫抗原的制備及應(yīng)用
    4.2 TGEV N蛋白單克隆抗體的制備
    4.3 金標(biāo)抗體和檢測(cè)用抗體的選擇
    4.4 TGEV抗原檢測(cè)試紙條的問(wèn)題
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
作者簡(jiǎn)介
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[2]禽流感與新城疫膠體金免疫層析快速檢測(cè)技術(shù)及初步應(yīng)用研究[D]. 彭伏虎.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
[3]狂犬病毒G，N基因的表達(dá)、單克隆抗體制備與膠體金免疫層析檢測(cè)試紙的研制[D]. 高明華.吉林大學(xué) 2007
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碩士論文
[1]豬傳染性胃腸炎病毒N蛋白的原核表達(dá)及間接ELISA方法的建立與應(yīng)用[D]. 徐向偉.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]豬流行性腹瀉病毒單克隆抗體膠體金免疫層析檢測(cè)方法的建立[D]. 魏艷秋.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015



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