【目的】胚胎的附植是一個復雜的生理過程，受諸多因素的調控。白血病抑制因子（LIF）與其受體（LIFR）結合,在排卵、胚胎發(fā)育及胚胎附植等過程中起重要的調節(jié)作用。為進一步研究白血病抑制因子及其受體（LIF/LIFR）基因在雌性牦牛繁殖周期生殖中的作用，本研究擬克隆牦牛LIF和LIFR基因，對其中進行生物信息學分析，且對兩個基因在雌性牦牛生殖器官中的表達進行研究。 【方法】基于印度水牛的LIF和家牛的LIFR基因的cDNA序列設計引物，通過RT-PCR方法克隆牦牛的LIF和LIFR基因序列，通過相關軟件及網絡資源對目的基因進行生物信息學分析，并結合RT-PCR方法和熒光定量RT-PCR，對LIF和LIFR基因在牦牛各生殖器官中的表達進行檢測。 【結果】本研究首次成功克隆了包含開放閱讀框的牦牛LIF和LIFR基因序列。其中牦牛LIF cDNA序列得到635bp�？寺〉玫�3329bp的牦LIFR cDNA序列。在牦牛生殖器官組織中表達研究顯示，LIF和LIFR在牦牛的各個生殖器官均表達。 【結論】LIF和LIFR在進化中較為保守。與家牛、印度水牛具有很高的同源性達到99.5％... 

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Summary
第一章 文獻綜述
    1. 哺乳動物胚胎附植
        1.1 附植的定義
        1.2 附植時間
        1.3 附植部位
        1.4 附植的過程
        1.5 胚泡附植的分子機制
    2.細胞凋亡
    3. 胚胎凋亡
    4.凋亡的檢測
        4.1 細胞凋亡形態(tài)學分析
        4.2 細胞膜結構改變分析
        4.3 細胞膜表面結構分析
        4.4 細胞內組分改變
        4.5 細胞 DNA 含量分
        4.6 原位標記技術 ISEL
        4.7 原位缺口平移 ISNT
        4.8 DNA 降解分析
    5.細胞因子
        5.1 白血病抑制因子（LIF）及其受體（LIFR）
        5.2 白血病抑制因子在繁殖中的作用
    6.生物信息學
    7.本研究的意義
第二章 牦牛 LIF、LIFR 基因的克隆及生物信息學分析
    1.材料與方法
        1.1 主要試劑
        1.2 主要儀器
        1.3 實驗方法
            1.3.1 樣品采集
            1.3.2 總 RNA 的提取與質量檢測
            1.3.3 基因克隆
            1.3.4 生物信息學分析
    2.結果
        2.1 牦牛 RNA 質量的檢測
        2.2 PCR 擴增
        2.3 基因重組子的鑒定
        2.4 牦牛 LIF/LIFR 基因克隆測序結果及生物性息學分析
        2.5 牦牛 LIF 基因生物信息分析結果
        2.6 牦牛 LIFR 基因生物信息分析結果
    3.討論
第三章 LIF、LIFR 在雌性牦牛內生殖器官組織中的表達
    1.材料與方法
        1.1 材料
        1.2 實驗方法
            1.2.1 樣品采集
            1.2.2 總 RNA 提取
            1.2.3 RT-PCR 分析
            1.2.4 相對熒光定量分析 LIFR 的表達
    2.結果
        2.1 牦牛各組織總 RNA 提取及凝膠電泳分析
        2.2 在繁殖周期內生殖器官的表達
    3.討論
參考文獻
致謝
導師簡介
個人簡介


【參考文獻】：
期刊論文
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[4]我國牦牛資源現(xiàn)狀及其產品開發(fā)利用前景分析[J]. 牛春娥,張利平,孫俊鋒,高雅琴,曹健民.  安徽農業(yè)科學. 2009(17)
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博士論文
[1]牦牛胚胎附植過程中細胞凋亡及其通路的研究[D]. 巨向紅.甘肅農業(yè)大學 2006



本文編號：3696722