【目的】胚胎的附植是一個復(fù)雜的生理過程，受諸多因素的調(diào)控。白血病抑制因子（LIF）與其受體（LIFR）結(jié)合,在排卵、胚胎發(fā)育及胚胎附植等過程中起重要的調(diào)節(jié)作用。為進(jìn)一步研究白血病抑制因子及其受體（LIF/LIFR）基因在雌性牦牛繁殖周期生殖中的作用，本研究擬克隆牦牛LIF和LIFR基因，對其中進(jìn)行生物信息學(xué)分析，且對兩個基因在雌性牦牛生殖器官中的表達(dá)進(jìn)行研究。 【方法】基于印度水牛的LIF和家牛的LIFR基因的cDNA序列設(shè)計引物，通過RT-PCR方法克隆牦牛的LIF和LIFR基因序列，通過相關(guān)軟件及網(wǎng)絡(luò)資源對目的基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析，并結(jié)合RT-PCR方法和熒光定量RT-PCR，對LIF和LIFR基因在牦牛各生殖器官中的表達(dá)進(jìn)行檢測。 【結(jié)果】本研究首次成功克隆了包含開放閱讀框的牦牛LIF和LIFR基因序列。其中牦牛LIF cDNA序列得到635bp。克隆得到3329bp的牦LIFR cDNA序列。在牦牛生殖器官組織中表達(dá)研究顯示，LIF和LIFR在牦牛的各個生殖器官均表達(dá)。 【結(jié)論】LIF和LIFR在進(jìn)化中較為保守。與家牛、印度水牛具有很高的同源性達(dá)到99.5％... 

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Summary
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1. 哺乳動物胚胎附植
        1.1 附植的定義
        1.2 附植時間
        1.3 附植部位
        1.4 附植的過程
        1.5 胚泡附植的分子機(jī)制
    2.細(xì)胞凋亡
    3. 胚胎凋亡
    4.凋亡的檢測
        4.1 細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)分析
        4.2 細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)改變分析
        4.3 細(xì)胞膜表面結(jié)構(gòu)分析
        4.4 細(xì)胞內(nèi)組分改變
        4.5 細(xì)胞 DNA 含量分
        4.6 原位標(biāo)記技術(shù) ISEL
        4.7 原位缺口平移 ISNT
        4.8 DNA 降解分析
    5.細(xì)胞因子
        5.1 白血病抑制因子（LIF）及其受體（LIFR）
        5.2 白血病抑制因子在繁殖中的作用
    6.生物信息學(xué)
    7.本研究的意義
第二章 牦牛 LIF、LIFR 基因的克隆及生物信息學(xué)分析
    1.材料與方法
        1.1 主要試劑
        1.2 主要儀器
        1.3 實驗方法
            1.3.1 樣品采集
            1.3.2 總 RNA 的提取與質(zhì)量檢測
            1.3.3 基因克隆
            1.3.4 生物信息學(xué)分析
    2.結(jié)果
        2.1 牦牛 RNA 質(zhì)量的檢測
        2.2 PCR 擴(kuò)增
        2.3 基因重組子的鑒定
        2.4 牦牛 LIF/LIFR 基因克隆測序結(jié)果及生物性息學(xué)分析
        2.5 牦牛 LIF 基因生物信息分析結(jié)果
        2.6 牦牛 LIFR 基因生物信息分析結(jié)果
    3.討論
第三章 LIF、LIFR 在雌性牦牛內(nèi)生殖器官組織中的表達(dá)
    1.材料與方法
        1.1 材料
        1.2 實驗方法
            1.2.1 樣品采集
            1.2.2 總 RNA 提取
            1.2.3 RT-PCR 分析
            1.2.4 相對熒光定量分析 LIFR 的表達(dá)
    2.結(jié)果
        2.1 牦牛各組織總 RNA 提取及凝膠電泳分析
        2.2 在繁殖周期內(nèi)生殖器官的表達(dá)
    3.討論
參考文獻(xiàn)
致謝
導(dǎo)師簡介
個人簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]哺乳動物附植前胚胎細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展[J]. 羅婷,蒙麗娜,劉曉華,孫洪亮,陸鳳花,石德順.  中國畜牧獸醫(yī). 2012(11)
[2]細(xì)胞凋亡檢測方法的研究進(jìn)展[J]. 佟俊杰,張廣耘,袁曉.  口腔醫(yī)學(xué). 2010(07)
[3]細(xì)胞凋亡常用檢測方法的研究進(jìn)展[J]. 郭延鋒,高均偉,朱國坡,劉興友.  中國畜牧獸醫(yī). 2010(02)
[4]我國牦牛資源現(xiàn)狀及其產(chǎn)品開發(fā)利用前景分析[J]. 牛春娥,張利平,孫俊鋒,高雅琴,曹健民.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2009(17)
[5]中國牦牛業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀及對策分析[J]. 郭憲,閻萍,梁春年,裴杰,曾玉峰,包鵬甲.  中國牛業(yè)科學(xué). 2009(02)
[6]哺乳動物著床前胚胎細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展[J]. 張家新,李金泉.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2008(09)
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[8]提高牦母牛繁殖性能的研究[J]. 張君.  青海畜牧獸醫(yī)雜志. 2007(03)
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[10]小鼠早期胚胎發(fā)育過程中細(xì)胞凋亡及凋亡基因表達(dá)的檢測[J]. 李威,王連卿,蘇靜艷,袁麗麗,嚴(yán)云勤.  細(xì)胞生物學(xué)雜志. 2006(04)

博士論文
[1]牦牛胚胎附植過程中細(xì)胞凋亡及其通路的研究[D]. 巨向紅.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號：3696722